北京重组药物支原体检测方法学验证

湖州申科的支原体验证菌株是支原体检测 NAT 方法验证的可靠选择，具备多重质量保障。菌株来源可靠，均取自国内外认可的合规机构验证菌株标准盘，溯源至美国模式菌种收集中心（ATCC）、中国兽医微生物菌种保藏管理中心（CVCC）等正规保藏机构，获得正式授权商用，如口腔支原体、肺炎支原体溯源至 ATCC，猪鼻支原体溯源至 CVCC。菌株生产在 BSL-2 生物安全实验室开展，符合国家生物安全法标准，针对不同菌株特性逐个优化生产工艺，涵盖超 10 种菌株的主代与工作代。质控环节严谨，采用固体平皿培养法测定 CFU（菌落形成单位），冻存前后均进行检测，确保菌落易观察分离与计数准确性；同时联合官方机构建立数字 PCR 标定方法，开展实验室间对比验证，监控 GC/CFU 比值，保障菌株活性与定量准确性，标定浓度涵盖 10CFU 和 100CFU，满足 NAT 方法验证需求。

湖州申科外源因子全自动核酸检测分析系统打造了 “样本进、结果出” 的高效检测流程，彻底简化支原体检测操作。检测只需一步式加样，最大支持 1mL 样本直接上样，无需复杂前处理，加样后系统自动完成核酸提取与检测，全程 3 小时内即可获取结果，其中样本准备时间不足 5 分钟，检测流程只需 2.5 小时。相比传统方法水浴消化、磁珠分离、洗脱等繁琐步骤，该系统操作极大简化，且配备 UI 触屏控制系统，内置标准化程序，支持扫码启动检测，无需专业 qPCR 操作培训，普通人员经简单指导即可上手。系统采用 4 通道单独运行设计，可同步开展不同样本检测，仪器还支持叠加延展通道，进一步提升检测产能，适配生物药多批次检测需求。

全球主流药典均认可 NAT 法作为支原体检测的替代方法，但明确要求需经过充分验证并证明与传统方法的可比性。欧洲药典（EP）2.6.7 规定 NAT 法可作为替代方法，需开展供试品抑制性验证；美国药典（USP）63&77 要求替代方法需与培养法、指示细胞培养法均具备可比性，且 USP<77> 专门针对支原体 NAT 法的验证与检测制定了规范；日本药典（JP）G3-14-170 允许经适当验证后的 NAT 法替代传统方法；中国药典 3301 及相关指导原则明确，CAR-T、干细胞等新型产品可采用 NAT 法，但需充分验证其最低检出限不低于药典方法，早期需与药典方法并行使用。此外，各国法规均强调，NAT 法的选择、开发与应用需基于科学依据，充分考虑培养基、生产工艺、潜在污染菌株等因素。

支原体检测 NAT 方法验证需满足全球药典对检测限、专属性、耐用性、可比性等关键指标的要求，且 EP、USP 新草案提出更严格标准。检测限（LOD）方面，EP 要求针对每种支原体确定临界值，需 3 次单独 10 倍梯度稀释、共 24 个检测数据，95% 检出浓度达标；USP 要求标准菌株浓度≤10 CFU/mL 或 100 GC/mL，≥24 次检测数据支持统计分析；ChP 未明确支原体专属要求，但需满足 “微生物检出下限数量” 设定标准。专属性上，EP 建议测试革兰氏阳性菌交叉污染，USP 要求生信分析与实际样品验证结合，ChP 强调外来成分不干扰试验。耐用性方面，EP 需验证试剂浓度、提取与反应程序变化，USP 涵盖设备、反应体系等参数波动。可比性上，EP 要求 NAT 法与药典法 LOD 及特异性对比，替代培养法需达 10 CFU/mL，替代指示细胞法需达 100 CFU/mL，USP 则视样品基质情况要求可比性研究。

针对新型生物制品中 10⁷细胞基质、全血、1mg/mL 高浓度质粒、5% 人白等特殊复杂样品基质，MycoSHENTEK^® 支原体 qPCR 检测试剂盒（2G）进行了方法性能验证，展现出极强的样品适用性。实验数据显示，在 CHO-S&Vero 细胞（10⁷个）、5% 人血白蛋白、全血等基质中，该试剂盒对 10 CFU/mL 或 100 CFU/mL 的支原体均能稳定检出，扩增曲线清晰可靠。其优化的前处理流程与检测体系有效规避了复杂基质的干扰，无需额外传代步骤，彻底解决了传统方法在复杂样品检测中易受抑制、结果不准的问题，覆盖病毒、培养液、成品等多种样品类型。

抑制物质检测是支原体培养法的关键前置环节，旨在排除供试品中抑制成分对检测的干扰。湖州申科按 USP 标准执行：对供试品进行一次抑制物质检测，若生产方法发生变化可能影响支原体检测结果，需重复该检测。检测通过两组平行实验对比实现：一组培养基加入供试品，另一组不加供试品，同步开展营养特性测试，判断供试品是否含抑制物质。若检出抑制物质，需通过适当方法中和或抵消其作用，例如使用不含抑制剂的底物，或将供试品稀释在更大体积的培养基中，确保支原体能在检测体系中正常生长，避免因抑制成分导致检测结果失真。