由于蛋白质的O-糖模式的异质性和O-糖结构的OpeRATOR特异性，形成了重叠的肽，从而可以获得O-糖位点的完整图谱为了进行比较，相同材料的标准胰蛋白酶消化物， 显示难以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR进行O-糖位点定位：OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶，可消化丝氨酸和苏氨酸糖基化位点的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。这会产生携带O-糖的糖肽，并能够使用质谱法进行O-糖分析、O-糖肽图谱以及中级分析。下面是OpeRATOR消解位点的示意图。上海倍笃生物科技有限公司（简称“倍笃生物”）代理Genovis的IdeS酶等。河北N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
Genvis测试去除唾液酸以揭示电荷变体：唾液酸是带负电荷的糖残基，存在于 N- 和 O-连接的聚糖上。唾液酸的固有电荷可能会使分析工作流程复杂化，从而掩盖其他重要的修饰。Microspin 色谱柱可用于 2 x 0.5 mg、5 x 0.5 mg 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 易于使用的离心柱；2. 提高酶与底物的比例，提高消化效率；3. 样品中不含酶。因此，唾液酸的去除有助于研究蛋白质中的潜在变体。该应用展示了一种快速简便的样品制备方法，可在电荷异构体分析之前去除所有唾液酸。河北N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究PNGase F酶在大肠杆菌中表达，该重组基因来源于伊丽莎白金氏脑膜败血症。
Genovis的SialEXO产品是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶。这些酶对天然糖蛋白或游离的聚糖结构上存在的 N- 和 O-连接聚糖均具有活性。SialEXO用于在用OpeRATOR或OglyZOR消化之前预处理O-糖基化蛋白。其他应用包括降低样品复杂性、电荷异构体分析和外切糖苷酶阵列。N-连接、O-连接和游离聚糖的高效去唾液酸化快速去除唾液酸，增强对蛋白质电荷变体的分析可固定在即用型离心柱中。然后可以用FabRICATOR消化所得的去糖基化蛋白，并通过中级质谱分析。我们将该工作流程应用于依那西普的分析，虽然未经处理的TNFR结构域过于复杂而无法分析，但O-聚糖组成可以在用PNGase F处理后进行分离和比较。
在这里，Genovis分析了 C1 抑制剂——一种人血浆衍生的生物zhiliao药物，由 6 种 N-聚糖和多达 28 种 O-聚糖修饰，主要由唾液酸he心 1 结构组成。在不对这种高度异质的蛋白质进行任何预处理的情况下，反相LC-MS分析产生了无法详细解释的复杂质谱图。在天然条件下使用OmniGLYZOR Microspin色谱柱，可在3小时内有效去除所有O-聚糖。然而，蛋白质上仍残留着 1 到 3 个 N-聚糖。使用冻干的PNGase F和OmniGLYZOR试剂盒中包含的MS友好型RapiGest™ SF表面活性剂*，在变性条件下通过额外的去糖基化步骤去除这些不可接近的N-聚糖。观察到所有聚糖的完全去除，但分子上存在的少量he心 2 O-聚糖除外。水解O-聚糖的酶不会从变性中获益，这就是为什么OmniGLYZOR Microspin色谱柱只能在非变性条件下使用的原因。生物制剂的表征和质量控制过程中确定电荷变体；
生成携带 O-糖的糖肽，该酶可实现 O-糖谱分析、O-糖肽图谱和位点占用测定，以及使用 MS 分析的中级方法。1.可靠O-聚糖特异性蛋白酶 – 消化丝氨酸/苏氨酸糖基化位点的 N 末端；2.稳健的消化，增强复杂生物制药的表征；3.高特异性 - 可靠的聚糖位点测定和定位。Genovis的OpeRATOR 是一种 O-聚糖特异性蛋白酶，可消化携带he心1 O-聚糖的蛋白质，糖基化（he心 1）Ser 和 Thr 残基的 N 端。OpeRATOR 来源于 Akkermansia muciniphila，并以 E 表达。大肠杆菌。该酶含有 His 标签，分子量为 42 kDa。SialEXO 来源于 Akkermansia muciniphila，并以 E 表达。大肠杆菌。SialEXO Lyophilized 中的酶也含有 His 标签，这些组分的分子量分别为 43 kDa 和 66 kDa。用于消化粘蛋白型O-糖蛋白和肽的冻干酶。Genovis的OpeRATOR 冻干剂以冻干粉末的形式提供，装在 2000 个单位的小瓶中，用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。N-聚糖在内质网zhong共翻译地连接到未折叠的蛋白质上；黑龙江固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
实现高通量 N-糖去除，简化糖蛋白底物的下游分析。河北N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
为了研究 OglyZOR 对天然糖蛋白的活性，将该酶与依那西普、TNFR 和阿巴西普在 37°C 下有或没有 SialEXO 孵育 1 小时。当唾液酸被去除时，OglyZOR酶有效地水解了所有三种底物中的O-聚糖。Genovis的OglyZOR 酶可有效水解天然糖蛋白中的he心 1 二糖 （Gal-β1,3-GalNAc）。这使得这些酶适合在LC-MS分析之前制备样品，以鉴定其他PTM或确认氨基酸序列O-糖基化生物制药的全去糖基化：O-糖基化生物制药（如依那西普）很难表征。为了能够通过质谱法测定完整质量数，我们进行了酶促总去糖基化。N-聚糖被Genovis的PNGase F裂解，而O-聚糖可以与OglyZOR和SialEXO一起去除。。河北N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶蛋白质组学研究
Fc N-聚糖在抗体的效应功能中起着至关重要的作用，但可能会增加蛋白质表征测定的复杂性。在天然条件下...
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