本发明涉及一种快速提取血液和口腔拭子基因组DNA的方法。背景技术：近年来，随着荧光PCR技术的不断成熟。该技术在科研及检验领域得到了应用，成为分子生物学领域不可或缺的一项重要技术。在进行遗传背景分析过程中，血液、唾液和口腔拭子成为重要的生物分析样本。但是，由于血液、唾液和口腔拭子中存在有很多PCR反应物，例如血液中含有血红素，蛋白质，脂肪，抗凝剂等，唾液和口腔拭子含有蛋白质，脂肪，抗凝剂等，使得用血液、唾液和口腔拭子直接进行荧光PCR反应变得尤为困难。因此，现在临床上往往先要从血液、唾液和口腔拭子样本中纯化出DNA，才能进行样本的DNA扩增。提取血液、唾液和口腔拭子基因组的方法种类非常多，传统酚氯仿抽提法，高盐盐析法，模离心柱吸附法，磁珠法，等等。经典的血液核酸提取方法包括几个过程。1.通过低渗液涨破红细胞，将血红素物质释放出来，然后离心，清洗去除血红素。2.通过裂解液裂解白细胞，释放核酸物质。3.通过离心柱或纳米磁珠特异性吸附核酸物质，去除其他杂质。4.通过漂洗液洗掉挂在离心柱或纳米磁珠表面的化学试剂残留和蛋白残留。5.加入洗脱液将核酸从离心柱或纳米磁珠上洗脱下来。 口腔拭子应该可以承受4N的垂直于轴向的静压力。湖北口腔拭子口腔拭子检测
本发明的特征在于：应用本发明的血液基因组DNA提取方法在10分钟内提取血液基因组可用于荧光PCR扩增检测，主要步骤如下。（1）将**管颠倒混匀后，吸取100μL血液或者吸取100μL口腔拭子样本保存液至，加入200μL的核酸释放剂，涡旋混匀，然后5000g离心30s，弃上清，获得细胞沉淀。（2）将步骤（1）中得到的血液细胞沉淀中再加入200μL核酸释放剂，涡旋振荡1min，至沉淀完全散开，然后5000g离心30s，弃上清。（口腔拭子样本则无需进行此步骤）。（3）向步骤（2）所获得的沉淀中加入50μL核酸释放剂，涡旋振荡1～2min；室温放置5min，12000g离心30s，取上清液即为提取的基因组DNA；所述的核酸释放剂组成为20mM～80mM的氢氧化钠溶液、～、～、～、～***钠、～3%甲酰胺；所述荧光PCR反应液组成为ROX、TaqMan探针、引物、dNTP、dUTP、UDG、BSA、聚合酶及缓冲液。附图说明图1为实例1检测的8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。图2～图5为实施例1提供的四份血液样本的三次平行实验的荧光扩增曲线图。图6为实施例2对比实例1提供的对8份血液样本平行实验的荧光扩增曲线图。具体实施方式为了使本领域技术领域人员更好地理解本申请中的技术方案。广东DNA口腔拭子源头直供口腔拭子外形应该是端正、整洁的、光滑的、色泽要均匀、没有毛刺、没有霉点、伤痕、刮痕、裂缝等缺限的。
深圳市华晨阳科技有限公司（Huachenyangtech）深圳市华晨阳科技有限公司是一家拥有生物医学领域自研技术，专注于基因检测临床应用、检测试剂及自动化仪器研发生产的****。中心点团队由生物学、医学、遗传学、生物信息学等领域的**人才组成。主营业务涵盖：核酸建库测序、荧光定量PCR、基因芯片等创新体外诊断试剂的自主研发生产、**研究、**早诊早筛、生殖医学、遗传病、微生物、病原体、慢病及健康管理等临床技术解决方案，以及生物药原材料研发制备。深圳华晨阳以成为精细医学国际化创新主体为目标，在深圳拥有一千多平米的综合性研发实验室与cGMP生产车间，以及**医学的研发实验室。华晨阳科技致力于生物医药、临床检测试剂的自主创新和国产化，凭借***低成本的产业优势，将大型人群队列样本转化为医学相关的基因大数据，为国内外生物产业提供更便捷更***的前沿生物信息技术服务。公司产品原研技术、规范生产、精细检测。采样拭子，口腔拭子，植绒拭子，植绒棉签，植绒采样棉签。
产地：国产|进口品牌：深圳市华晨阳科技有限公司编号S008规格：100mL|250mL|500mL鼻腔/口腔拭子DNA保存液能提供一种简单、安全、方便、有效的口腔/鼻腔拭子DNA样品保存，在室温下（15～25℃）保存口腔（鼻腔）拭子DNA超过1年，DNA保持完整、不降解，为获得下游实验所需要的高质量DNA提供了可靠保障。
本产品具有以下特点：
1、操作使用简单、安全。
2、口腔（鼻腔）拭子DNA样品在保存液存放，可在室温下贮存超过1年，DNA没有降解，为运输和存储提供方便，并**减**冷成本。
3、获得的口腔鼻腔上皮细胞DNA质量好，产量高，可完成各种基因检测及分析实验。如：qPCR、SNP和sequencing分析。
4、能抑 制各种霉菌的生长，并能杀灭各种传染因子，特别是空气及呼吸道的传染细菌及***，可避免试验人员在处理样品时受到病人***细菌的传染。鼻腔/口腔拭子DNA保存液技术参数：*每100ML的唾液保存液大约可以保持200份口腔（鼻腔）拭子样品（根据所用拭子的大小可能有变化）。*在室温下（15°C–25°C）保存口腔上皮细胞完整的gDNA1年以上。*每个拭子可获得µg～µg的基因组DNA产量(样品不同，DNA产量有所不同）。*提纯的DNA：A260/A280值～。DNA长度≥23Kb。 口腔拭子应该持续15s而不产生长久变形或者折断的现象。
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口腔拭子在使用时要握住手柄，将拭子伸进口腔用刷牙的力度同时旋转拭子，让拭子头部充分接触口腔粘膜。湖北口腔拭子口腔拭子检测
加入20μteinaseK溶液，混匀。加入200μL缓冲液GB，充分颠倒混匀，在56℃放置14min（期间颠倒混合样品数次），溶液应变清亮，若未完全变清亮，延长裂解时间至完全变清亮。加人200μL无水乙醇，充分振荡混匀10s，此时可能会出现絮状沉淀。将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm离心30s，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入500μLGD（已加入无水乙醇），12,000rpm离心30s，弃废液，将吸附柱CB3放回收集管中。向吸附柱中加入600μLPW（已加入无水乙醇），12,000rpm离心30s，弃废液，将吸附柱CB3放回收集管中。12,000rpm（~13，400×g）离心2min。将吸附柱放置新的，以彻底晾干吸附柱中残余的漂洗液。向吸附柱中悬空滴加50～200μL洗脱缓冲液，室温放置2～5分钟，12,000rpm（~13，400×g）离心2min，将溶液收集到离心管中，测定浓度及纯度后，取3μL，加入到配制好的荧光PCR反应液，于ABI7500荧光PCR仪中进行扩增。用本发明和对照产品对8份样本同时进行荧光PCR扩增。结果如图6，本发明所有反应孔背景信号好、Ct值都在21～25之间，荧光扩增曲线呈典型的S型。湖北口腔拭子口腔拭子检测
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