诺奖Exosome基础研究

外泌体表征与定量难在什么地方？又该怎么做？我们拜访过很多外泌体研究工作者，其中谈到多的是外泌体难以分离，分离后的外泌体不好定量，定量的外泌体数据是否准确等问题。很多人认为外泌体的分离难点在于样本差异、杂质类型或外泌体来源于细胞等，但业内人事认为，外泌体的分离之难，在于没有很好的方法去判定外泌体的纯度和活性。本文从外泌体定量和表征的角度来分析，什么样的外泌体才是高质量的，以及如何对外泌体进行计数。单一定量和表征方法的局限性对外泌体的鉴定方法，目前行业内基本上是一致的：通过形态、粒径范围、标志蛋白等定性检测。1.单一定量方法的局限性对外泌体的定量，使用较多的还是颗粒数。众所周知，外泌体被定义为30-150nm的小细胞外囊泡，比较大和小的外泌体表面积相差25倍、体积相差125倍。而外泌体发挥功能主要依赖其所载货物，比较大和小外泌体对受体细胞的效应也会有较大差异。同时颗粒数的检测方法包括NTA或纳米流式等，并不能分辨外泌体和其他具有相识粒径的其他杂质，在计算颗粒数时，不同纯度外泌体数据的可参考性也并不相同。所以通过颗粒数来对外泌体定量，可能有其局限性。外泌体研究工具标准化操作流程，新手也能快速上手，降低培训成本。诺奖Exosome基础研究

大体积外泌体样本量分离方法总结大体积外泌体样本在浓缩后根据不同应用，需衔接不同的外泌体分离方法。维思克思总结出现在常用、简便、效果比较好的三种方法。SEC重力柱是基于分子排阻色谱原理，根据被分离组分分子大小差异进行外泌体的分离。具有操作简便、高纯度和高回收率等优点，特别适用于大体积样本中的外泌体分离。分离的外泌体可用于WB分析、NTA或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究、细胞和动物功能研究等。（WSR0003）SEC离心柱是离心柱式的外泌体分离产品，离心柱中装填的介质能无差别的吸附杂质而不结合外泌体，实现超快速、高收率的外泌体分离。分离的外泌体可用于WB分析、NTA或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究、细胞和动物功能研究等。（WSP0016）磁珠法外泌体分离试剂盒基于自主研发的均相液体磁珠，能特异性捕获外泌体，实现高纯度、高回收率外泌体分离。具有操作简便、高纯度和高回收率等优点，特别适用于血浆、血清等复杂样本中的外泌体分离。分离的外泌体可用于WB分析、NTA或纳米流式粒径分析、电镜检测、组学研究、细胞和动物功能研究等。（WSR0002-2）大规模胞外囊泡转录组外泌体研究工具高效分离技术，缩短实验周期，提升研究进度效率。

外泌体分离提取方法大全外泌体快速、简便、高纯度、高回收率的分离方法是在大规模应用的前提。维思克思编制了外泌体分离方法大全：亲和磁珠法分离（WSR0002-2）能特异性捕获外泌体，实现高纯度、高回收率外泌体分离。具有操作简便、高纯度和高回收率等优点，特别适用于血浆、血清等复杂样本中的外泌体分离。凝胶排阻色谱法分离（WSR0003）基于分子排阻色谱（SEC）原理，根据被分离组分分子大小差异进行外泌体的分离，可以获取分子大小均一、高纯度的外泌体。特别适用于大体积样本中的外泌体分离。SEC离心法分离（WSP0015/WSP0016）是离心柱式的外泌体分离产品，离心柱中装填的介质能无差别地吸附杂质而不结合外泌体，实现超快速、高收率的外泌体分离。沉淀法分离（WSR0026/WSR0037）是一款沉淀法外泌体分离试剂盒，可用于多种样本的外泌体分离，具有操作简便、分离速度快和外泌体回收率高等特点。离子交换法分离（WSR0031）适用于10-30mL细胞培养上清样本中外泌体的分离纯化，基于阴离子交换层析原理，特异性吸附样本中带负电的外泌体，然后高效洗脱，实现外泌体的浓缩和分离。

外泌体标记真的只能用PKH和DiR吗？外泌体作为近几年的“科研新贵”，可谓是红极一时。由于它们具有独特的迁移、靶向和选择性内化进入特定细胞的能力，是非常有前途的递送载体。然而，目前在外泌体的示踪研究和应用上还存在一些难点：难点一：目前对于胞外囊泡的标记方法有很多种，包括亲脂性的染料(如：PKH、Dil等)，这些染料与外泌体膜不是共价结合，而是通过疏水相互作用短暂结合在一起的。在后续的细胞摄取时，会出现示踪染料在不同膜结构或脂溶性物质间发生不断解离和结合的现象，从而影响结果的准确性。ps：分离的外泌体中也会存在一些脂质，也会与示踪试剂结合。难点二：目前外泌体等胞外囊泡有一部分的归宿是在溶酶体，而溶酶体的酸性环境，绝大多数外泌体示踪染料发出的荧光都会淬灭，那么这一部分外泌体的去向就难以检测到。该外泌体示踪试剂盒来自维思克思生物科技，是该公司两项发明专利转化而来，对比其他染色方法，该探针具有低背景、高效率、强耐酸的优势！产品信息：ExosomeWisTracker-IIKit（WSR0001-2）。外泌体研究工具原料溯源体系完善，保障产品质量可追溯，降低风险。

外泌体研究常见问题解答61.如何鉴定提取出来的外泌体？根据MISEV2023，鉴定外泌体首先需要通过WB来鉴定细胞外囊泡的标志蛋白是否存在于样品中，通过电子显微镜来观察样品中细胞外囊泡的形态特征，通过NTA等手段来分析样品中细胞外囊泡的群体特征（粒子浓度、直径分布等）。一般从外泌体形态、外泌体粒径和外泌体标志物来鉴定。（1）鉴定外泌体形态：通常使用透射电镜检测（TEM）；（2）鉴定外泌体粒径（大小）和浓度：可以使用纳米颗粒跟踪分析（NTA）、纳米流式、纳米库尔特粒度仪检测；（3）鉴定动物细胞外泌体标志物：通常使用WB检测外泌体标志蛋白（CD63、CD9、CD81、TSG101、Alix等），按国际细胞外囊泡协会的建议为检测3个阳性（一般选择2个表面标志，1个内部标志）和1个阴性指标（Calnexin或GM130）。外泌体研究工具小批量试用装供应，适合前期方法学验证，降低试错成本。胞外囊泡货源

外泌体研究工具长期合作支持政策，持续技术服务，降低长期合作成本。诺奖Exosome基础研究

外泌体作为近几年的“科研新贵”，可谓是红极一时。由于它们具有独特的迁移、靶向和选择性内化进入特定细胞的能力，是非常有前途的递送载体。然而，目前在外泌体研究和应用上还存在以下痛点：痛点一：由于目前对这些内源性囊泡了解还不够深入，尤其是在体内行为方面上，将外泌体治zhi疗转诊至临床故而仍为一大难点。体内追踪外泌体可以提供有关其生物分布、迁移能力、毒性、生物学的重要知识角色，沟通能力和行动机制。痛点二：目前对于胞外囊泡的标记方法有很多种，包括亲脂性的染料(如PKH系列、Dil系列)，然而这些染料标记方法存在一些不足。维思克思的示踪探针基于两项发明专利，对比其他染色方法，该探针具有低背景、高效率、强耐酸的优势！发明名称：1.一种pH敏感型探针分子及其应用；2.一种探针分子的合成方法。WSR0001-2工作原理为共价方式嵌入外泌体膜结构。当染料结合外泌体膜后，可通过荧光显微镜准确观察到外泌体在细胞内运动与行踪。突出优势：特异性高，无背景干扰；标记效率高，该探针以共价的方式嵌入胞外囊泡的双层膜结构，优于亲脂性染料，避免自组装形成的纳米粒子造成信号干扰。在低pH（酸性）条件下也可显色。诺奖Exosome基础研究

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