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外泌体研究常见问题解答105.外泌体研究，应选用血浆还是血清？血清是血液凝固之后收集的液体，所以其中少了纤维蛋白原，凝血因子，以及多了很多凝血产物。纤维蛋白原可转化为纤维蛋白，具有凝血功能。在凝血过程中血小板会分泌大量的外泌体，有研究发现血清中有接近50%的外泌体来自额外的分泌。血浆=血液-血细胞血清=血浆-纤维蛋白原-凝血因子所以一般实验选择血浆，在特殊情况下，如研究与血小板相关的疾病的时候，当然是血清更适合。6.外泌体血液样本提取需注意事项？全血在长时间放置，冷冻、离心等会发生溶血现象，此时不建议分离外泌体。7.细胞培养去除血清源外泌体？a.将细胞培养用的血清通过100000g超速离心10h，去除血清外泌体；b.选择无血清培养基进行细胞培养。c.使用商业化的无外泌体胎牛血清（WSC0020）8.如何提取组织细胞外泌体？将组织剪成小块，在无血清培养基中培养12h；转移至离心管中，4℃3000g离心20min去除培养液中杂质和细胞碎片，将上清液用0.45μm过滤，接着用0.2μm过滤，然后选择合适的外泌体分离方法。外泌体研究工具规模化生产储备，保障供应稳定，应对突发实验需求。积雪草胞外囊泡代工

外泌体研究常见问题解答145.外泌体RT-qPCR实验是选择哪个靶标作为内参？外泌体没有公认内参，理由如上。常规内参基因在外泌体中表达量甚至可能比目标基因还低。外参是在没有合适内参的情况下的替代物。miRNA检测外参是化学合成的线虫短片段单链RNA(cel-miR-39-3p)在人、小鼠、大鼠中均无同源片段，比较大限度降低了对定量实验造成的干扰。6.外泌体SmallRNA-seq实验，样本量有什么要求？肿瘤细胞系推荐使用40mL以上的初始样品量。某些细胞（如悬浮细胞、干细胞、神经细胞等）中外泌体含量比较低，建议使用100mL的初始样品量。一般需提取到10ng以上的TotalRNA，才可以用于SmallRNA-seq实验。7.如何确保外泌体RT-qPCR和SmallRNA-seq实验的成功率？为了保证转录组实验的成功率，建议对提取的外泌体RNA进行质控，确保RNA质量。如检测RNA的浓度、纯度和片段分布等，但由于外泌体RNA含量较低，建议使用商业的外泌体RNA质控试剂盒对RNA质量进行评估。便捷EVs装载外泌体研究工具一体化实验方案，从提取到分析全覆盖，降低综合投入。

外泌体研究常见问题解答119.在分离过程中，外泌体含量会发生变化吗？准备的步骤越少，结果越好。很明显，即使你是一个非常熟练的操作员，将超离作为预富集步骤也会导致囊泡的损失。因此，即使囊泡的纯度很高，也无法控制哪些囊泡在处理过程中的丢失。10.为什么沉淀法或超速离心法提取的外泌体看不到沉淀？这种问题通常有三种可能性：1）使用的样本体积太小或外泌体含量太低。2）使用了不透明的超速离心管，一般来说外泌体产量都比较小，不透明管底很难见到明显沉淀的，可以当作有沉淀，继续往后操作即可。3）使用了粘附性低的耗材。部分角转管壁粘附性很低，沉淀很难富集或沉淀很容易滑落，请圆底离心管离心。11.外泌体和微囊泡可以分开提取吗？外泌体和微囊泡无法明确区分二者，所以无法完全分开。维思克思推荐使用下列简便方法：提取外泌体等粒子直径小的细胞外囊泡时，请选用10000g离心后的上清样品；提取含微囊泡在内的大粒子直径的细胞外囊泡时，首先要回收1200g离心的上清，然后将其10,000g离心分离获得的沉淀用PBS悬浮后作为样品使用。同时提取上述两种细胞外囊泡，请使用1200g离心分离的上清作为样品。

外泌体研究常见问题解答83.外泌体是如何可视化和/或计数的？外泌体太小（30–150nm），无法使用常规显微镜观察，因为这于大小至少为几微米的物体。光学显微镜的分辨率太低，无法观察外泌体。外泌体大小分布的典型分析方法包括纳米粒子跟踪分析（NTA）、纳米流式和电子显微镜。尽管在方法上非常不同，但这些技术都允许你研究尺寸低至10纳米的纳米颗粒。要确定样本中外泌体的浓度，可以使用NTA、纳米流式。它们通过不同的原理对纳米颗粒（10–1000nm）进行计数和粒径测定。NTA可能是获得溶液中颗粒平均尺寸和浓度信息的常用方法。然而，这种方法无法区分大小相同的囊泡和蛋白质聚集体。因此，我们建议将这种方法与显微镜技术相结合，以验证膜的存在。4.外泌体电镜是不是一定要有膜结构，无膜结构的球体是外泌体吗？负染电镜结果中外泌体的形态肯定是那种明显的茶托样或者大饼样的！边缘有一圈略微更明亮的亮圈。如果你打到的结构是没有膜结构的圆球形，那么您很可能看到了脂蛋白颗粒或者抱团的蛋白质。外泌体研究工具长期合作支持政策，持续技术服务，降低长期合作成本。

外泌体定量和表征。研究外泌体的同行们（包括我）一直被外泌体的定量和表征所困扰，什么样的外泌体才是好的外泌体呢？是评估其活性？纯度？蛋白浓度？还是其他什么指标？或者说我们在做实验时，怎样对外泌体进行定量呢？这个可以说是进行外泌体实验的第一步，必须确定外泌体的量，才好判断实验变量是否影响外泌体的发生或者确定下游应用实验的给药剂量。你们是如何进行定量的呢？目前的外泌体定量方法有以下几种，分别是：纳米颗粒跟踪分析（NTA）、纳米流式、表面标志物的ELISA定量试剂盒、BCA或Bradford蛋白定量试剂盒。注：受认知所限，有没有涵盖的，欢迎补充。上述外泌体定量方法中，以BCA蛋白浓度测定应用的广，也容易得到（也就是可及性很高）。但是，但是我们分离的外泌体，因获取样本的不一致，每种样本中杂蛋白的含量不尽相同，同时分离方法也不一定相同，这就导致我们很难确定蛋白量与外泌体量的对应关系。所以，我们这些外泌体研究者就在两难之间不断横跳。为了解决这些困境，维思克思生物科技提供了整套外泌体鉴定技术服务、外泌体分离、示踪、保存、游离染料清qing除、蛋白定量、脂质定量、核酸定量等系列产品。外泌体研究工具完备验证数据，提供详细技术文档，减少方法验证时间。人参细胞外囊泡药物装载

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维思克思的外泌体浓缩方案-超滤管02超滤管超滤。超滤浓缩是一种常用的分离技术，利用超滤膜对组分进行分离。溶液通过超滤膜，利用膜孔的大小选择性，将分子量较大的物质过滤出来，而将分子量较小的物质通过膜孔。本产品基于低蛋白吸附的过滤膜，根据膜的大小规格以达到样本浓缩或分离的效果。具有操作简单，离心时间短，回收率高等特点。可用于生物样品浓缩，分离，蛋白除杂等领域。使用方法：1.样本澄清通过膜过滤样本，使样本澄清，去除杂质。2.超滤管平衡超滤管中加入适量PBS，在转子中离心。移去装置底部PBS。3.样品超滤向超滤管中加入5ml样品，离心。弃除收集管中液体，回收浓缩样品。积雪草胞外囊泡代工

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