吉林10X单细胞测序数据分析

针对单细胞测序的细胞上样数，为什么不建议捕获到的细胞数量越高越好？一味地追求高数量的细胞捕获可能会存在一些问题。例如在上机细胞悬液浓度固定时，如果目标细胞捕获数增加到8000甚至10000，上样细胞悬液体积势必增加，在细胞悬液质量不是很理想（细胞活性<90%、碎片率>5%、结团率均>5%）的情况下，引入的背景信号会增加，分析结果不理想的直接体现包括：cell、non-cell无法有效区分和Fraction reads in cells偏低。当cell和non-cell无法有效区分时，会使得数据出现假阳性和假阴性结果！当目标细胞捕获数很大时，多细胞率会增加，数据分析时，此部分“cell”表现为基因检测数和UMI检测数是正常cell的N倍（N是一个GEM包裹的细胞数），导致所有细胞的统计数据（单个细胞基因检测中位数、单个细胞UMI检测中位数）虚高。此部分“cell”虽然可以通过设置数据分析阈值进行过滤，但是容易会有此类数据的残留和正常高基因检测细胞的人为去除！烈冰实验室包含从样本处理到测序下机的全套实验平台。吉林10X单细胞测序数据分析

细胞中基因的表达是严格按照时间和空间顺序发生，因此细胞类型和基因表达具有时间特异性和空间特异性。时间特异性可以通过收集不同时间点的样本进行单细胞转录组测序来分析。但是单细胞转录组测序（scRNA-Seq）在单细胞悬液制备的过程中破坏了细胞的空间结构，无法给出固态异质化组织中细胞空间排布信息。而空间转录组可以解决这个问题，其以点阵形式记录组织切片细胞的空间信息，在保留组织形态结构的基础上，获得细胞/基因的空间表达特异性。吉林10X单细胞测序数据分析十二年测序经验，烈冰生物单细胞多组学领域的佼佼者。

作为单细胞测序的一个重要里程碑，10x genomic公司于2016年2月推出10x Chromium Single Cell Gene Expression Solution，此平台整合了仪器、试剂盒和信息学软件，能精确对接illumina测序仪，因此可实现大量大细胞的快速高效标记、测序和分析，获得单细胞水平的基因表达谱和差异情况，并通过对复杂细胞群体进行深入细致分析，绘制大规模单细胞表达图谱。 以量化细胞内的群体异质性，并逐个鉴定细胞类型、细胞状态和动态细胞跃迁。除了有望鉴定新的细胞亚型和稀有细胞群体，单细胞技术还能更好地了解转录动态和基因调控关系。

10× Genomics官方建议，当单细胞悬液活性低于70%时应做去除死细胞操作，并推荐使用MACS® Dead Cell Removal Kit(Miltenyi Biotec)。需要注意到，去除死细胞的操作会损失一定的细胞数量，10× Genomics和Miltenyi Biotec都没有给出单细胞悬液含有多少细胞数量才建议做去除死细胞的操作。基于烈冰多年单细胞测序实验经验，建议当细胞悬液进行质量和活性检测后，考虑对细胞活性在50%-70%的悬液进行去除死细胞的操作。而太低活性的悬液（小于30%），悬液中细胞大量死亡，可能已经丢失了原组织内的细胞比例和状态，失真严重，建议重新收集样本进行新的实验，保证数据的高质量和实验结果的准确性。单细胞测序技术遍地开花，烈冰服务让您的医学研究如虎添翼。

烈冰科技作为国内率先同时拥有10X Genomics和BD Rhapsody双分选平台的测序服务商及云计算服务供应商，经过多年实战，拥有丰富的单细胞悬液制备和分选经验，实测BD Rhapsody对能够高效捕获粒细胞。针对不同的分选平台、建库方法，实战总结搭建出不同的数据预处理工作流程；烈冰科技NovelBrain®生物大数据平台能有效支撑生命科学研究、医疗健康等领域对大数据分析的需求。高通量测序实验平台，包括NovaSeq 6000、10X Chromium X、BD FACSMelody、PANNORAMIC数字切片扫描仪等，配合一支来自海内外名校、多学科交叉型的高素质综合团队，为您的科学研究保驾护航。单细胞测序技术的迅速发展和应用推广，为从多维度揭示疾病发展提供了强有力的工具。陕西高通量测序单细胞测序服务

高通量测序技术是对传统测序一次突破性的改变，一次对几十万到几百万条核酸序列进行测定。吉林10X单细胞测序数据分析

单细胞获得困难，不同组织要求不尽相同难以搞定？ 烈冰2000+项目消化经验，100+组织类型解离protocol，精心设计不同组织实验的解离、细胞悬浮实验体系，确保单细胞的获得。 冻存样本无法实验，珍贵样本无法使用？ 烈冰采用国际认可的冻存组织复苏技术以及死细胞过滤技术，确保冻存组织使用。 珍贵样本，细胞数量太少，消化背景杂无法做单细胞？ 采用国际认可的10X Genomics，BD Rhapsody双平台模式，根据样本实际情况和用户需求提供客观有效的实验方案,细胞量少，背景杂也能做单细胞。 单细胞RNA分类精度不足，部分细胞无法细分？ 烈冰同时采用单细胞蛋白质组与单细胞转录组测序技术，真正做到从上游到下游的全流程检测，确保超高的细胞分类精度。吉林10X单细胞测序数据分析

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