Single Cell Sequencing技术,即利用优化后的高通量测序技术(NGS,Next Generation Sequencing)分析每一个单个细胞的序列信息,从而更高分辨率地揭示细胞间的细胞差异以及其在微环境中的功能情况。那么问题来了,如何获得单个细胞?如果无法获得单个细胞这一切都是不成立的;如何获得大批量的单个细胞?单个组织细胞群体通常在百万级别以上,如果被检测的测序细胞数量过小精确度不足;如何低成本地获得大批量单个细胞?单细胞测序成本非常高,尤其是需要测2000~3000个以上的细胞的时候,如果单个细胞的分选成本也很高,技术根本无法普及。所以,正因为这些问题的存在使得高通量测序在单个细胞测序应用中的普及度一直不足,直到几个单细胞测序突破性技术的诞生。搭建多种测序数据的生物信息分析平台,5000+项目检验,真实可信赖。温州BD VDJ单细胞实验平台
关于单细胞测序实验样本制备,这与流式细胞术用户熟悉的步骤完全一致,也就是通过酶促或机械消化、细胞分选或其他细胞分离技术从整个样本中制备生成活的单细胞悬液。随后是细胞计数和质量控制步骤,以确保您的样本有适当浓度的活细胞,并且不含细胞团块和死细胞碎片。如有必要,您还可以使用抗体对样本进行染色,标记细胞表面蛋白或其他生物分析物,或者通过FACS来富集感兴趣的细胞类型。解离样本时采取的具体步骤将根据您的起始材料和实验目标而定。也许需要额外的制备步骤,具体取决于组织质量、样本丰度、细胞大小,以及是否需要提取出细胞核进行染色质可接近性分析。无论具体的考虑因素如何,所有样本类型都遵循同一个基本原则,那就是生成高质量的单细胞悬液。南京single cell 单细胞测序烈冰斥巨资引进Novaseq6000,开启更大通量测序新纪元。
根据烈冰多年单细胞测序服务经验,为什么不建议您一味的追求高细胞数量的捕获:单细胞测序所有的分析都是基于细胞聚类进行,而细胞聚类是在区分cell和non-cell后,获得细胞基因表达谱,通过降维(pca),无监督聚类以及可视化(t-SNE)得到的。进行细胞聚类时需要考虑到每个细胞的基因表达模式,因此即使是相同的数据,在剔除几个细胞的情况下,前后获得的聚类图也会出现明显不同。而当细胞捕获数过多时,无论是假阴性和假阳性数据还是多细胞数据,都会对正常细胞聚类产生影响,造成聚类结果失真。这也是很多文章,特别是很多高分文章,为什么单个样本捕获细胞数在2000-3000的原因了。烈冰建议单个样本捕获细胞数在3000-5000个时,数据量在100G左右时,可以满足分析和文章发表的多重需求。
多样本数据合并:Fraction of Reads Kept:合并样本时,各样本根据Mapped Barcoded Reads per Cell数量计算出来的数据利用率。如果各样本间该参数值相差很大,需要进行Downsample处理,以数据量少的样本为基准将不同样本中细胞测序深度标化到同一水平,从而避免因测序深度差异导致的基因检测数量、基因表达水平的差异。烈冰科技自主研发的单细胞云平台致力于帮助每一位客户定制化分析数据,深度解读数据分析结果,深入挖掘其背后的生物学意义;从操作便捷、结果可视化、分析可追溯、系统稳定等方面助力单细胞研究,加速科研进程!BD单细胞测序平台同时兼容单细胞蛋白组测序(Ab-seq)和免疫组库测序等工作。
烈冰生信团队倾情研发的NovelBrain®生信大数据分析平台,针对庞大的单细胞测序数据,能够实现细胞类型鉴定的快、精、准:一键导入gene list构建个性化基因列表;轻松一点即可展示Marker基因的Feature plot;任意修改Cluster的颜色和名称助力高效鉴定细胞类型;一键获得t-SNE图、Heatmap和Violin图:轻松获得并下载基因表达的t-SNE图、Heatmap、Violin图,还可以通过调节宽、高和系数比例来调节美观。平台上线300+task自主分析工具、50+pipeline工作流模板,帮助烈冰生信分析团队和自主分析用户实现分析工具和模板的快速调用和一站式全流程自动化分析,节省工作时间并提升整体工作效率。基于磁珠Barcode和UMI及polyT的探针结构,精细区分上万个细胞中mRNA的来源及表达丰度。珠海BD单细胞平台
2019年,烈冰已助力发表了采用BD Rahpsody平台的单细胞风湿类文章。温州BD VDJ单细胞实验平台
针对BD Rhapsody单细胞捕获平台,烈冰生物提供专业的优化试剂和专业知识:BD Rhapsody试剂是转为 Rhapsody 系统设计,旦性能已得到验证的产品,因此研究人员可以专注于解决生物学问题,而不必花费时间应对多组学分析的技术障碍。此外,我们还提基于BD平台的单细胞多组学服务,如Ab-Seq检测试剂盒使用的抗体已在流式细胞分析中得到充分研究,这使得研究人员能够建立真值并迅速加深对生物学系统的理解。作为BD中国单细胞联合实验室的合作伙伴,我们将继续扩展检测试剂盒和试剂产品组合的范围,以支持前沿多组学分析。我们经验丰富的专业客户服务团队可在多组学分析的各个方面为您提供帮助。温州BD VDJ单细胞实验平台
上海烈冰生物医药科技有限公司拥有生物科技、医药科技、信息科技、计算机科技领域内的技术开发、技术服务、技术转让、技术咨询,市场营销策划,市场信息咨询与调查(不得从事社会调查、社会调研、民意调查、民意测验),从事货物及技术的进出口业务,计算机、软件及耗材(除专控),软件开发【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】等多项业务,主营业务涵盖单细胞测序,生物大数据云分析平台,空间转录组测序,单细胞多组学测序。目前我公司在职员工以90后为主,是一个有活力有能力有创新精神的团队。诚实、守信是对企业的经营要求,也是我们做人的基本准则。公司致力于打造***的单细胞测序,生物大数据云分析平台,空间转录组测序,单细胞多组学测序。公司深耕单细胞测序,生物大数据云分析平台,空间转录组测序,单细胞多组学测序,正积蓄着更大的能量,向更广阔的空间、更宽泛的领域拓展。