BD Rhapsody单细胞转录组测序是利用单细胞水平上的高通量测序分析基因表达谱的技术,突破传统高通量测序的局限性,针对多种组织类型的样本,采用BD 细胞悬液制备protocol组织解离后,单个样本一次上机能捕获500-10000个细胞, 基于每个细胞分别建库测序,获得单个细胞的基因结构和基因表达状态,并鉴定细胞的类型,可以在不同样本间从细胞类型的组成和丰度角度进行比较,反映细胞间的异质性,提供足够灵活的定制测定法以满足多种实验需要,并有效缩短实验是时间和降低测序成本。BD平台基于cyto-seq技术,实现细胞和磁珠的一对一结合。厦门single cell 单细胞测序
烈冰与国内高校、研究所、医院和药企单位开展深度合作,服务于600+临床与研究机构,1000+客户和5000+重要科研项目,助力并联合发表300+篇CNS等国际学术期刊(不完全统计),在单细胞领域,烈冰助力用户发表单细胞文献30+篇,总IF>300+,IF>10+以上文章占比65%以上,包含Immunity、Nature Cell Biology、Nature Plants 、Advanced Science等生物领域国际主流学术期刊,已发表文章研究领域涵盖包括COVID-19研究、疾病发生转移机制,免疫研究、脑神经、白血病、胚胎发育、糖尿病、退行性疾病和植物领域研究等。重庆BD VDJ单细胞转录组测序附加流式分选细胞表面Marker,对于较低分辨率的标志物也能有效鉴定,助力高要求测序项目。
单细胞测序实验再样本细胞上机分选签,需要对细胞数量、细胞活性进准判断,这对Single Cell分选标记、建库、下机数据的质量都具有着决定性的作用。如若细胞计数偏高,将会影响建库的成功率;计数偏低,则会提高双细胞的比例;而细胞活率过低,就会使测序数据的利用率大打折扣,因此把好单细胞悬液质量这一关尤为重要。而在铺板过程中,由于不同操作人员手法具有不可避免的差异,不同的液体流速将直接影响单细胞的入孔效果。因此烈冰生物BD Rhapsody单细胞分选平台配套了专门定制的电动移液器,其具有Prime Treat、Cell Load、Bead Load、Wash、Lysis、Retrieval多种操作模式,来对应各种不同的操作。通过已经设定的程序来控制液体的流速,大幅度降低人为操作习惯带来的差异,保证实验操作的一致性。
关于单细胞测序实验样本制备,这与流式细胞术用户熟悉的步骤完全一致,也就是通过酶促或机械消化、细胞分选或其他细胞分离技术从整个样本中制备生成活的单细胞悬液。随后是细胞计数和质量控制步骤,以确保您的样本有适当浓度的活细胞,并且不含细胞团块和死细胞碎片。如有必要,您还可以使用抗体对样本进行染色,标记细胞表面蛋白或其他生物分析物,或者通过FACS来富集感兴趣的细胞类型。解离样本时采取的具体步骤将根据您的起始材料和实验目标而定。也许需要额外的制备步骤,具体取决于组织质量、样本丰度、细胞大小,以及是否需要提取出细胞核进行染色质可接近性分析。无论具体的考虑因素如何,所有样本类型都遵循同一个基本原则,那就是生成高质量的单细胞悬液。烈冰对于一个细胞群体中的每个细胞单独进行建库测序分析。
相对于Smart-Seq技术在细胞数量上的问题,BD平台普遍提供的细胞数量都在1000-10000不等的测序细胞量,特殊研究需求的项目,可提供上限40000个细胞的捕获量(单个样本)。这个量级的测序细胞量已经可以说能够完全覆盖绝大部分组织的Single Cell群体类型。因此,对于基于基因表达进行准确细胞分型上,无论是从细胞数量上来说还是表达检测可靠性来说,都会更实用。此外针对特殊项目研究,如需要捕获和分析脆弱的细胞,如粒细胞、中性粒细胞、CAR-T细胞、干细胞、移植瘤细胞、骨髓瘤细胞等,烈冰生BD平台也有更好的捕获效能,满足您的实际需求。单细胞多组学测序可识别重要的转录因子,进行谱系和发育追踪。西安BD VDJ单细胞测序服务
单细胞测序技术的迅速发展和应用推广,为从多维度揭示疾病发展提供了强有力的工具。厦门single cell 单细胞测序
对于单细胞测序而言,常常需要先构建细胞图谱,在此基础上再开展后续各项分析,并且数据分析时以细胞聚类(cell cluster)为讨论对象,而不是像常规Bulk测序一样以组别为分析对象,因此单细胞测序项目对样本入组要求没有Bulk测序那样严格,但是单细胞测序,特别是目的为图谱研究时,需要通过提高样本复杂度(增加样本数),尽可能的构建某一疾病类型、群体细胞图谱信息。因此,单细胞测序实验设计时首先需要保证生物学重复,不同样本来源的样本建议单独进行细胞解离和捕获、建库、测序,以保证捕获到足够的细胞数,单个样本分别捕获细胞时,后续分析除了整体分析以外,还可以做单样本分析,保证分析的完备准确性。厦门single cell 单细胞测序
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