10XVisium的实验主要分为两部分:组织学板块和组学板块。组织学板块包括样品的包埋、切片、固定、染色及成像,记录切片的形态学信息;组学板块包括cDNA的合成、扩增、接头连接和测序,记录切片的转录本信息和空间位置信息。具体实验流程如下:A、切片制备和优化:取新鲜组织、冷冻、切片,并进行HE染色成像,优化确定切片是否覆盖靶向区域。B、切片固定和透化:将组织切片放置在含有与RNA结合捕获探针的载玻片上,并进行固定和透化,使细胞中的mRNA得到释放,并结合到相应的捕获探针上,从而获取基因表达信息。C、逆转和文库构建:以捕获的RNA为模板,进行cDNA合成,和测序文库制备。D、高通量上机测序:对制备好的测序文库,进行二代高通量短读长测序。E、数据可视化分析:结合HE结果,确定哪些基因有表达,表达量高低,以及这些基因的空间位置信息自主研发PanoCell单细胞实验测序平台。重庆scRNA空间转录组测序服务
烈冰科技作为国内同时拥有10XGenomics和BDRhapsody双分选平台的测序服务商及云计算服务供应商,经过多年实战,拥有丰富的单细胞悬液制备和分选经验,实测BDRhapsody对能够高效捕获粒细胞。针对不同的分选平台、建库方法,实战总结搭建出不同的数据预处理工作流程;烈冰科技NovelBrain®生物大数据平台能有效支撑生命科学研究、医疗健康等领域对大数据分析的需求。完备的高通量测序实验平台,包括NovaSeq6000、10XChromiumX、BDFACSMelody、PANNORAMIC数字切片扫描仪等,配合一支来自海内外名校、多学科交叉型的高素质综合团队,为您的科学研究保驾护航。武汉上海烈冰生物空间转录组测序空间转录组测序数据分析,认准烈冰NovelBrain生物信息数据分析平台。
转录组分析指对细胞内所有转录产物的分析。转录组测序一般是对用多聚胸腺嘧啶(oligo-dT)进行亲和纯化的RNA聚合酶II转录生成的成熟mRNA和ncRNA进行高通量测序。相对于传统的芯片杂交平台,转录组测序无需预先针对已知序列设计探针,即可对任意物种的整体转录活动进行检测,提供更精确的数字化信号,是目前深入研究转录组复杂性的强大工具。FFPE空间转录组技术原理 为同时获得空间表达和组织学背景信息,该方案首先将FFPE组织切片置于Visium基因芯片上进行组织学染色和成像,然后利用切片下方Visium基因芯片上的探针进行表达定量。
空间转录组技术流程:1、组织优化由于不同物种、组织来源的样本所需的比较好透化时间不尽相同,在正式开展空间转录组测序实验前,需要利用组织优化kit进行条件的摸索。组织优化芯片上包含8个捕获区域,每个区域均覆盖了荧光标记探针,可捕获mRNA形成带有荧光标签的cDNA,随即可通过荧光成像结果判定比较好透化时间及组织优化条件。2、空间转录组测序确定组织优化条件后,即可进行切片、H&E染色及成像、空间转录组文库构建及测序分析流程。空间转录组测序因其强大的探究疾病--细胞--基因的关系,一度成为高通量测序技术的“天花板”。
空间转录组学(Spatial Transcriptomics)是指在组织切片上完成,保留样本空间信息的组学研究。空间转录组可展示组织切片中不同区域的基因表达情况,揭示精细病理区域中激发的信号通路,完成分子特征驱动病理特征的机制解析。空间转录组学完成了病理数字化结合病理影像化的技术革新,对于诊断标志物、耐药位点以及靶向药物的研发,免疫治等新兴领域都具有重要作用。当组织冷冻切片附在带有spatialbarcode的空间转录组芯片上时,通过透化处理,细胞内的mRNA释放出来,从而被芯片上带有oligo-dT的探针捕获。被捕获的mRNA开始逆转录,得到的cDNA中包含了spatialbarcode序列。通过上机测序,可以将每个mRNA转录的序列映射回组织切片中的映射回组织切片中的原始位置。空间转录组可展示组织切片中不同区域的基因表达情况,揭示精细病理区域的信号通路。上海烈冰科技空间转录组测序服务公司
空间转录组测序技术的迅速发展和应用推广,为从多维度揭示疾病进展提供了强有力的工具。重庆scRNA空间转录组测序服务
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