为同时获得空间表达和组织学背景信息,该方案首先将FFPE组织切片置于Visium基因芯片上进行组织学染色和成像,然后利用切片下方Visium基因芯片上的探针进行表达定量。由于FFPE样本通常存在RNA高度降解的问题,针对FFPE样本的Visium空间基因表达解决方案无法像新鲜冻存组织样本一样利用完整mRNA具有的poly(dA)序列进行mRNA捕获。该方案采用针对编码基因的成对RNA模板连接探针(RTL)与mRNA杂交。左侧探针(LHS)具有部分Read 2序列,右侧探针(RHS)具有合成的poly(A)序列。左右探针与mRNA杂交后彼此连接,而mRNA被RNase降解。组织透化后,被连接的成对探针与芯片上包含空间Barcode、UMI和poly(dT)序列的引物序列捕获,并且空间Barcode和UMI序列被延伸到成对探针序列上。携带空间Barcode的探针序列用于进行测序文库构建和测序。测序序列上的空间Barcode用于将测序序列定位到组织切片图像上,UMI用于基因表达定量。空间转录组测序技术提供了空间转录组水平下的科学研究视角。无锡烈冰生物空间转录组测序服务公司
细胞中基因的表达是严格按照时间和空间顺序发生,因此细胞类型和基因表达具有时间特异性和空间特异性。时间特异性可以通过收集不同时间点的样本进行单细胞转录组测序来分析。但是单细胞测序结果动辄上百G数据量,庞大的数据对于分析平台和分析能力有着很高的要求,单细胞转录组测序(scRNA-Seq)在单细胞悬液制备的过程中破坏了细胞的空间结构,无法给出固态异质化组织中细胞空间排布信息。而空间转录组可以解决这个问题,其以点阵形式记录组织切片细胞的空间信息。广州烈冰空间转录组测序服务公司空间转录组测序技术的迅速发展和应用推广,为从多维度揭示疾病进展提供了强有力的工具。
单细胞测序是指针对单个细胞进行全转录组测序分析,可精确地描述每一个细胞的状态,在异质性发育过程中具有不可忽视的应用价值。然而,单细胞测序无法给出固态异质化组织中细胞空间排布信息,对于揭示发育过程、病理微环境都存在很大的局限性。空间转录组测序以点阵形式记录病理切片细胞的空间信息并进行测序,可以精确指示点阵内的全部基因表达情况。空间转录组测序的加入,无疑让单细胞测序如虎添翼,更精确地勾勒了组织水平的异质性。
细胞在组织样本中的相对空间位置关系对于了解疾病病理学非常重要。但是scRNA-Seq在单细胞悬液制备的过程中破坏了细胞的空间结构,无法给出固态异质化组织中细胞空间排布信息。而空间转录组可以解决这个问题,通过记录组织切片细胞的空间信息,捕获组织切片中的组织学信息;通过免疫荧光进行蛋白组检测,将基因表达谱映射回组织样本中的原始位置,同时获得细胞/基因的空间表达特异性。该技术可以为神经科学,发育生物学,免疫生理学等领域的研究提供组织和基因表达情况的新视角。烈冰开展了空间转录组、单细胞多组学以及空间转录组等多种产品在内的全套科研解决方案。
10XGenomics和Drop-Seq的技术原理。是利用十字交叉的通道,从横向孔道中逐一输入凝胶微珠,纵向孔道输入细胞,凝胶微珠与细胞碰撞后会吸附在凝胶微珠上,并通过微流控技术,将之输入到油相孔道中。这时候,就形成了一个个油滴后输出并收集在EP管中。每一个油滴中会落入一个细胞以及一个凝胶微珠,那么在每一个凝胶微珠中上长满了不同的CellBarcode和UMIBarcode连接形成的序列,再加上一端PolyT的抓手,构成我们的捕获凝胶微珠。而这个凝胶微珠抓手就会使用oligodT抓住mRNA构建文库,进而完成细胞中RNA的捕获过程。附加流式分选细胞表面Marker,对于较低分辨率的标志物也能有效鉴定,助力高要求测序项目。烈冰科技空间转录组数据分析
空间转录组测序可识别重要的转录因子,进行谱系和发育追踪。无锡烈冰生物空间转录组测序服务公司
烈冰生物生信分析团队紧追国际前沿、整合添加多项国际期刊认可的空转分析工具,构建一套完整的数据分析流程;精心研发空转结果浏览器,可同步展示空间转录组与单细胞测序分析结果,详细深入地解析空间转录组数据。完成从Rawdata(原始数据)到Spot-Gene的具有定位信息的表达矩阵的过程后,就进入了空转的第二步,去进行Spot的Cluster的过程,熟悉单细胞测序的研究者知道,Cluster在单细胞测序中往往表示为细胞的类型,也就是说能聚在一起采用算法分为一个群体细胞是一个Celltype(当然分情况也会有不同)。而在空转中,也正是由于前面提到了细胞的非单一性,导致了这里的分群并不是单纯的同一细胞类型,而应该认为是具有相同细胞组成的点阵区域,或者说是近似的组织结构区域。无锡烈冰生物空间转录组测序服务公司
上海烈冰生物医药科技有限公司拥有生物科技、医药科技、信息科技、计算机科技领域内的技术开发、技术服务、技术转让、技术咨询,市场营销策划,市场信息咨询与调查(不得从事社会调查、社会调研、民意调查、民意测验),从事货物及技术的进出口业务,计算机、软件及耗材(除专控),软件开发【依法须经批准的项目,经相关部门批准后方可开展经营活动】等多项业务,主营业务涵盖单细胞测序,生物大数据云分析平台,空间转录组测序,单细胞多组学测序。公司目前拥有较多的高技术人才,以不断增强企业重点竞争力,加快企业技术创新,实现稳健生产经营。上海烈冰生物医药科技有限公司主营业务涵盖单细胞测序,生物大数据云分析平台,空间转录组测序,单细胞多组学测序,坚持“质量保证、良好服务、顾客满意”的质量方针,赢得广大客户的支持和信赖。公司凭着雄厚的技术力量、饱满的工作态度、扎实的工作作风、良好的职业道德,树立了良好的单细胞测序,生物大数据云分析平台,空间转录组测序,单细胞多组学测序形象,赢得了社会各界的信任和认可。