二代测序单细胞测序多组学测序

单细胞测序实验再样本细胞上机分选签，需要对细胞数量、细胞活性进准判断，这对SingleCell分选标记、建库、下机数据的质量都具有着决定性的作用。如若细胞计数偏高，将会影响建库的成功率；计数偏低，则会提高双细胞的比例；而细胞活率过低，就会使测序数据的利用率大打折扣，因此把好单细胞悬液质量这一关尤为重要。而在铺板过程中，由于不同操作人员手法具有不可避免的差异，不同的液体流速将直接影响单细胞的入孔效果。因此烈冰生物BDRhapsody单细胞分选平台配套了专门定制的电动移液器，其具有PrimeTreat、CellLoad、BeadLoad、Wash、Lysis、Retrieval多种操作模式，来对应各种不同的操作。通过已经设定的程序来控制液体的流速，大幅度降低人为操作习惯带来的差异，保证实验操作的一致性。烈冰开展了单细胞转录组、单细胞多组学以及空间转录组等多种产品在内的全套科研解决方案。二代测序单细胞测序多组学测序

10×Genomics单细胞方案要求使用具有较高活性的单细胞悬液。在实际实验中，我们发现因为样本类型和制备单细胞悬液方法的不同，容易出现单细胞悬液中死亡细胞的比例较高的情况。去除单细胞悬液中的死细胞和其他污染物对获得高质量数据是至关重要的。这是因为，死亡的细胞易裂解导致其中的RNA释放出来。这种cell-freeRNA会导致检测的背景噪声，并会影响单细胞数据的质量。因此当样本活性较差时，对细胞悬液中细胞活性检测后，需要进行一般死细胞去除的工作（一般悬液活性小于70%时考虑此操作），以保证较高的上机捕获细胞的质量。成都高通量测序单细胞测序数据分析烈冰生物首批引进 Chromium X 平台，开启百万级通量单细胞测序新时代。

单细胞测序结果动辄上百G数据量，庞大的数据对于分析平台和分析能力有着很高的要求，首先针对下机数据的质控环节：单细胞测序产生数亿的结果序列，不可避免的会出现低质量的测序结果，存在各种情况的序列污染。因此序列过滤及质量评估就会变得极为重要。序列质量主要通过测序质量值Q20/Q30的占比来表征，即碱基测序结果的错误率在1%/0.1%以下的比例。理想的测序结果reads的碱基质量均高于30。保证数据获得后的处理结果的准确性，为后续细胞类型鉴定和功能分析打下坚实基础。

单细胞RNA-seq、RNA-seq和逆转录qPCR（RT-qPCR）都采用一个共同过程，即分离RNA并将其转化为cDNA进行分析。不过，每种分析在开展方式和获得的数据上有所不同。RNA-seq和RT-qPCR都是先从大量细胞中分离RNA，然后将其转化为cDNA。RNA-seq是使用cDNA来构建新一代测序文库，从而测定整个转录组的基因表达。RT-qPCR则是从cDNA中扩增特定靶点，并通过荧光测定表达水平。RT-qPCR限于已知靶点，而RNA-seq可实现无偏倚的全转录组基因表达分析。然而，这两者只能提供细胞群体内基因表达的平均情况。单细胞RNA-seq则在分离RNA之前将单细胞分离到微孔或单个微反应容器中。然后用细胞特异性的条形码标记RNA，确保来自每个细胞的cDNA可以追溯到起源细胞。与RNA-seq相似，带有条形码的cDNA也被用于构建新一代测序文库，从而能够对每个细胞的整个转录组进行基因表达测定。个性化制定测序项目方面，满足从检测基因到蛋白的多组学测序要求。

单细胞多组学提升见解基于测序的数据能够将彰显其强大之处，因为它能够了解同一单细胞的多种生物分析指标。如果说单细胞基因表达提供了一种颜色的详细信息，那么单细胞多组学提供了同一细节的全彩色图谱，为您带来样本的真实视图。烈冰2021年强势引进的10xGenomicsChromium单细胞平台能够从同一单细胞中读取细胞复杂性的多组学特征。与传统方法不同，单细胞多组学简化了您需要开展的实验，也节省了您需要分析的样本，而能获得相同的结果。这不但节省了宝贵的样本，还保证了更高的生物学准确性，因为您不需要匹配拆分样本的数据集并通过计算来推断各个组学之间的关系。十二年测序经验，烈冰生物单细胞多组学领域的佼佼者。烈冰单细胞测序服务机构

ATCG碱基的排列组合构成了测序的庞大世界。二代测序单细胞测序多组学测序

FluidigmC1平台作为应用于单细胞测序（SingleCellRNASequencing）领域的商业化分选技术，基于富鲁达（Fluidigm®）的微流控技术，大约在几个小时中可以捕获96个左右的细胞，进行各类的Single-Cell测序建库。当然，通量还是比较小。但不可否认的是，现在很多非RNA类SingleCell测序，仍然在采用这样的技术，如SingleCellDNA-Seq，SingleCellATAC-Seq等，都是采用此技术进行单细胞分选后再分别用不同试剂盒建库。所以可以说，至少在10X和BD，或者其他企业推出有效的SingleDNA测序技术之前，C1仍然会是市场上的重要组成部分。二代测序单细胞测序多组学测序

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