为同时获得空间表达和组织学背景信息,该方案首先将FFPE组织切片置于Visium基因芯片上进行组织学染色和成像,然后利用切片下方Visium基因芯片上的探针进行表达定量。由于FFPE样本通常存在RNA高度降解的问题,针对FFPE样本的Visium空间基因表达解决方案无法像新鲜冻存组织样本一样利用完整mRNA具有的poly(dA)序列进行mRNA捕获。该方案采用针对编码基因的成对RNA模板连接探针(RTL)与mRNA杂交。左侧探针(LHS)具有部分Read 2序列,右侧探针(RHS)具有合成的poly(A)序列。左右探针与mRNA杂交后彼此连接,而mRNA被RNase降解。组织透化后,被连接的成对探针与芯片上包含空间Barcode、UMI和poly(dT)序列的引物序列捕获,并且空间Barcode和UMI序列被延伸到成对探针序列上。携带空间Barcode的探针序列用于进行测序文库构建和测序。测序序列上的空间Barcode用于将测序序列定位到组织切片图像上,UMI用于基因表达定量。烈冰智造空间转录组细胞捕获,媲美国际主流的单细胞平台。成都烈冰科技空间转录组数据分析
RNA测序(RNA-seq)是转录组学研究的重要工具,也是生命科学领域常用的技术之一。相比于传统通路研究低维度、低通量的局限性,转录组学有以下优势:1)能够动态考察细胞基因组的表达,多维度地反映差异变化;2)可用于研究占RNA绝大部分的非编码RNA,研究其结构以及在细胞生命活动中的重要调控作用;3)与蛋白组学研究相互补充,多角度呈现细胞水平的变化信息。作为转录组学研究的技术基础,RNA测序技术也在不断地更新迭代,现如今更大通量、更深精度的测序为众多科研和医学工作者提供了丰富的工具和探索真理的手段。西安上海烈冰生物空间转录组测序服务公司烈冰全线实验平台满足超深度、大规模发现和复杂疾病研究的测序。
10XGenomics和Drop-Seq的技术原理。是利用十字交叉的通道,从横向孔道中逐一输入凝胶微珠,纵向孔道输入细胞,凝胶微珠与细胞碰撞后会吸附在凝胶微珠上,并通过微流控技术,将之输入到油相孔道中。这时候,就形成了一个个油滴后输出并收集在EP管中。每一个油滴中会落入一个细胞以及一个凝胶微珠,那么在每一个凝胶微珠中上长满了不同的CellBarcode和UMIBarcode连接形成的序列,再加上一端PolyT的抓手,构成我们的捕获凝胶微珠。而这个凝胶微珠抓手就会使用oligodT抓住mRNA构建文库,进而完成细胞中RNA的捕获过程。
10xGenomics空间转录组用于文库构建的每张载玻片上有四个捕获区域,每个捕获区域的大小为6.5x6.5mm,包含5000个被条形码标记的点(barcodedspots),每个点的直径为55μm,点和点之间中心的距离为100μm,并且每个点都有一个barcode序列。组织切片的细胞中会释放出mRNA,迁移到每个spot的mRNA会被标记上相应的barcode序列,然后进行文库构建并进行测序。根据数据的条形码信息对数据进行分析,以确定哪些数据来自哪个位置,从而实现空间基因表达的可视化。烈冰开展了空间转录组、单细胞多组学以及空间转录组等多种产品在内的全套科研解决方案。
在发育过程或疾病发生过程中,组织内部的不同细胞经历了复杂的生物学过程,因此,组织内部的异质性研究是目前揭示重要生物学研究的一个重要研究手段。组织内部的异质性包括细胞类型的异质性和空间位置的异质性两个层面,细胞类型异质性可由单细胞测序来完美呈现,而空间位置的异质性,则需要可高通量地检测全转录组空间信息的新型研究方法来解决。烈冰生物真正实现空间转录组测序的全程把控,做到从实验设计、空间信息标记、建库测序、定制化分析的全流程一站式服务,助力高分文章发表。丰富的测序和数据分析经验,烈冰配套全程个性化、定制化地数据分析服务。厦门BD空间转录组数据分析
基因测序相关产品和技术已由实验室研究逐渐演变到临床应用,是下一个改变世界的技术。成都烈冰科技空间转录组数据分析
烈冰生物已空间转录组测序服务提供从一个组织切片样本中获取包括空间信息在内的全部转录组数据,从而可以区分和定位功能基因在特定组织区域内的活跃表达。其可以检测组织样本中的所有基因活动,并绘制活动发生的位置,这将有助于科学家更好地构建生物图谱,并进一步理解疾病和生物学过程。目前,空间转录组主要应用于多种疾病、免疫、发育、神经和病理学等研究领域。烈冰生物具有专业的实验团队、丰富的切片经验,配置了国际主流的仪器设备,实验团队针对不同组织类型优化完善实验方案,并制定了严谨规范的实验室SOP流程,保证空间转录组切片的质量,全优保障测序数据质量。成都烈冰科技空间转录组数据分析
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