华南地区全自动多重数字PCR解决方案

3D数字PCR为液体活检提供技术支持液体活检是一种非侵入性的检测基因及临床效果的一种方法，目前可能正在开展有关3D数字PCR在在液体活检中的疗效，为后期临床提供更多可靠的指导作用。报道称“无创伤性肺检测技术即将登陆中国”。随着基因检测技术，如类似3D数字PCR技术的发展，推动我们将进入了“DNA的应用商城”这样的新时代，如23andme、华大基因等专业的检测服务机构，提供更加专业的基因检测结果，经基因报告解读师或遗传咨询师进行通俗的解读，让我们每一个人都能够了解自己的基因，拥有自己的“生命之书”，让我们更加健康的生活。精细医疗其实本质是应用生物学信息与大数据科学的交叉发展的新型医学概念与医疗模式。对于精细医疗，重点在于“精细”，不仅只是简单的基因测序如此简单，更需要精细的诊断与精细的。数字PCR是定量技术，基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量，是一种定量的方法。华南地区全自动多重数字PCR解决方案

dPCR在使用过程中需要特别注意体积误差造成的结果偏差。体积误差对于测量拷贝数浓度会产生偏差。目前dPCR中体积优化方法以光学显微镜观测为主。分散体积的差异会增加拷贝数结果的不确定性，Emslie等使用光学显微镜纵向拍照比较图片边缘的微小差异，考察了数字PCR系统中每个微孔内和孔与孔间的体积差异对实验结果的影响程度。Corbisier等使用微滴数字PCR对6种不同质量分数棉籽粉质粒DNA标准物质[ERM-AD623a-f，浓度范围（10~10）copies/ul]进行分析，优化了液滴体积得到相应校正因子，并使用该校正因子发现并校准了运行软件中液滴体积不变的假设而引起的数据偏离，数据结果的一致性有明显提高。法国锐讯数字PCR价格数字PCR具有诸多优点，但也存在一定的不足，如成本高、仪器操作复杂、经济效益低等。

引物设计（DesignPrimers）：引物长度（PrimerLength）：18-25个碱基之间。短的引物更易于同靶序列结合，但过短的引物也更可能同基因组上的多个区域相结合而产生非特异性扩增产物。更长的引物会提高同靶序列结合的特异性，但过长的引物（>30bp）同靶序列结合速度变慢，降低结合率。引物长度和组成直接影响引物Tm值（PrimerMeltingTemperature）和退火温度（AnnealingTemperatures）。引物的组成——GC%含量（GCContent）：指引物总碱基中G和C碱基数量的百分比，该值应在40-60%之间。如果模板序列的GC含量较高，推荐使用较高Tm值的引物。

无创产前筛查有望成为数字PCR在临床快速落地的锏应用。首先，无创产前筛查领域对于兼顾成本、准确性、速度的创新技术的需求还未满足。其次，无创产前筛查市场空间庞大，虽说中国每年新生儿的增长速度正在放缓，但每年仍有超过1000万的新生儿，带来了巨大的想象空间。2022年6月，郑大一附院遗传与产前诊断中心、塔歌生物联合在JournalofTranslationalMedicine（影响因子5.531）杂志上发表文章，验证了数字PCR作为T21,T18和T13产前筛查方法的可行性，这是世界上报道在真实临床条件下通过盲检实现一管反应可从孕妇血浆样本中同时检测出T21、T18和T13的数字PCR无创产前筛查试剂盒。文章显示，塔歌生物胎儿染色体非整倍体无创产前筛查数字PCR试剂盒总体筛查的灵敏度为100%，特异性为95.12%，均优于血清学筛查。除准确率高之外，塔歌生物的产品还拥有成本低、操作简便，及检测速度快等优势，可以加速无创产前筛查在各级医院，特别是基层地区普遍落地，助力中国出生缺陷防控。数字PCR是通过将一个样本分成几十到几万份，分配到不同的反应单元，每个单元至少包含一个拷贝的目标分子 。

相比于qPCR，dPCR在转基因检测中具有以下优势：（1）检测灵敏度高：理论上dPCR的灵敏度可达1个拷贝，而实际应用中dPCR的小检出限和比较低定量限数值非常接近，所以dPCR可以在非常低的目标拷贝数下得到精确的结果；通常转基因比参考基因（内源基因）浓度低很多；（2）前处理简单且受基质成分干扰较小：dPCR反应效率和精密度受到食品基质成分干扰影响较小，可应用于混合基质样品中低丰度DNA的检测；（3）dPCR对抑制剂的敏感性较低：由于dPCR结果表示为“有荧光“或“无荧光”，即使存在抑制剂降低了荧光强度仍可以表示为“有荧光；（4）适合多重转基因检测：食品或饲料提取的DNA中可能包含多种转基因片段，可以进行多重dPCR检测，提高分析效率。同时，dPCR可以直接溯源至SI国际单位制摩尔，适合单一、双重及多重转基因标准物质研究，一次可识别不同的转基因区域。下面详细进行说明。全自动数字PCR一体机可以适用于包括医疗检测领域在内的多种应用场景。华南地区全自动多重数字PCR解决方案

在患者术后复发检测中，数字PCR评估出的ctDNA阳性，可以早于影像学数月提前揭示出患者复发。华南地区全自动多重数字PCR解决方案

了解泊松分布，我们先要从二项式分布说起，二项式分布是一个离散概率分布，它给出了m次试验中k次成功的可能性，每次试验的概率为p，例如当掷骰子时，二项分布给出了在10次试验中恰好有7次掷出4的概率。在数字PCR的情况中，投掷骰子类似于将一个目标实体随机“投掷”到一组分区中，当目标落在选定的分区中时，就是成功。如果有n个分区，并且分区过程是完全随机的，则目标出现在所选分区中的概率为1/n。该试验重复m次，样品中的每个分子一次。如下所示的二项式分布给出了k个成功的概率，即所选分区恰好包含k个分子的概率。数字PCR通常采用大量分区。当n很大，并且尝试成功的概率(1/n)很小时，二项分布可以近似为泊松分布。华南地区全自动多重数字PCR解决方案

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