在使用dPCR进行转基因检测时，通常直接参照qPCR的方法。使用不同技术对相同样品检测时，两种方法的灵敏度是否具有可比性成为关注的问题。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765（12板，每板765个微单元）芯片数字PCR分析仪测定标准物质ERM-AD413检测转基因玉米MON810。该小组应用dPCR技术评估在qPCR定义下的灵敏度数值，在拷贝数200-700之间，dPCR与qPCR的测量结果具有一致性。但与qPCR的灵敏度相比，dPCR在低于拷贝数200时有被低估的风险，在高于拷贝数1000时有被高估的风险。dPCR在同一阵列上同时测量转基因和内源性靶点时，需要稀释内源性靶点...

在使用dPCR进行转基因检测时，通常直接参照qPCR的方法。使用不同技术对相同样品检测时，两种方法的灵敏度是否具有可比性成为关注的问题。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765（12板，每板765个微单元）芯片数字PCR分析仪测定标准物质ERM-AD413检测转基因玉米MON810。该小组应用dPCR技术评估在qPCR定义下的灵敏度数值，在拷贝数200-700之间，dPCR与qPCR的测量结果具有一致性。但与qPCR的灵敏度相比，dPCR在低于拷贝数200时有被低估的风险，在高于拷贝数1000时有被高估的风险。dPCR在同一阵列上同时测量转基因和内源性靶点时，需要稀释内源性靶点...

naica®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于crystal微滴芯片数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的一定程度上拷贝数浓度，融合传统微滴式和芯片式优势，被称为下一代数字PCR技术。只需一步移液操作，将PCR反应液加载于创新型微流控芯片，naica®六通道微滴芯片数字PCR系统即可自动生成单层平铺的2D微滴阵列，随后对每个微滴进行温度均匀一致的PCR扩增后，进行六通道荧光信号采集，计数阴阳性微滴，通过泊松分布计算获得靶标基因一定程度上拷贝数浓度。在dPCR中，样品被分区，使得样品内单个的核酸分子被定...

naica®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于crystal微滴芯片数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的一定程度上拷贝数浓度，融合传统微滴式和芯片式优势，被称为下一代数字PCR技术。只需一步移液操作，将PCR反应液加载于创新型微流控芯片，naica®六通道微滴芯片数字PCR系统即可自动生成单层平铺的2D微滴阵列，随后对每个微滴进行温度均匀一致的PCR扩增后，进行六通道荧光信号采集，计数阴阳性微滴，通过泊松分布计算获得靶标基因一定程度上拷贝数浓度。数字PCR的两大应用场景在于基因检测、无创出生缺陷筛查...

数字PCR系统的分散方式决定了分散数量，其结果基于统计的方法进行定量，增加反应单元数量（统计样本量），可以增加其检测的容量和动态检测线性范围达到和qPCR相近的动态范围，同时减小一个反应单元中包含多个分子所造成的误差，达到提高灵敏度和准确度。影响dPCR定量结果的因素包括：仪器采用的分散方式与数量、溶液稀释方法、分散体积的准确性以及结果表达方式。分散方式与数量由数字PCR系统决定，分散体积和结果表达方式需要实验人员在实验过程中优化得到。通过不同cluster的位置进行突变位点的判断时存在误判的现象。华南地区国产数字PCR荧光通道目前全球数字PCR的市场规模约1.5亿-2.5亿美元，约占荧光定量...

基于数字PCR技术平台，塔歌生物成功地开发了胎儿染色体非整倍体(T21,T18和T13)无创产前筛查试剂盒（数字PCR-NIPT），并已完成数百例临床样本验证。数字PCR-NIPT的阳性检出率和NGS相似，且成本接近血清学，可以在上述应急策略中取代血清学作为灵敏度和特异性更高的初筛方法，以有效提高阳性检出率，降低需要复筛的假阳性样本数和节省总的筛查成本。数字PCR应用前景广阔，可用于病原微生物检测、基因检测、无创产前筛查、测序结果验证等领域。但目前，大多数医院采购的数字PCR仪器是用于科研层面，在临床应用上仍处于起步阶段，未得到普遍应用。通过“仪器+试剂”相互配合的方式，打出了数字PCR检测的...

dPCR的测量结果通常表示为含量，即拷贝数值或转基因质量百分比，而QPCR结果通常表示为拷贝数的质量分数。目前市场上可购买到大多数转基因标准物质，以qPCR定值的标准物质是以拷贝数（单倍体基因组当量）的质量分数来表示特性量；以dPCR定值的标准物质直接采用拷贝数比例来表示特性量。不同方法使用不同的表示方式，会造成测量结果不可比。因此质量分数、拷贝数和拷贝数比例之间的关系需要转化，才能得到单位一致，数值可比的数据。EU联合研究中心建议使用转换因子从拷贝数换算到质量分数。PCR本质上是将一个传统的PCR反应分成了数万个PCR反应。华南地区一体化数字PCR系统根据泊松分布的定义和适用条件可知，如果我...

微滴数字PCR主要是将两种互不相溶的液体，以其中一种作为连续相（油），另一种作为分散相（水），在水/油两相表面张力和剪切共同作用下分散相以微小体积单元的形式存在于连续中，从而成液滴。这种液滴式的反应腔室具有体积小、样品间无扩散等优势。在ddPCR中，利用微滴发生器可以一次生成数万乃至百万个纳升甚至皮升级别的单个油包水微滴，作为数字PCR的样品分散载体。这里，液滴中包裹了单拷贝DNA模板和PCR反应液，然后将液滴收集在PCR反应管中进行扩增。PCR反应结束后检测每个微滴的荧光信号。目前Bio-Rad公司的QX100系统、QX200系统均为采用液滴技术的数字PCR系统。图6.Bio-Rad的液滴...

产物越短，往往扩增效率越高。模板二级结构（Templatesecondarystructure）：PCR变性中和变性后的单链DNA不够稳定，容易自发折叠形成二级结构。应避免可形成稳定二级结构的模板链区域，因为如果模板链形成的二级结构在退火温度下稳定存在，定位在模板链二级结构处的引物将无法同模板链相结合。使用mfold可预测引物待结合的区域是否存在复杂的二级结构。设计引物时，尽量使引物定位在模板二级结构以外的序列上。避免具有4个以上相同的连续碱基的区域（Avoid>4repeatsofsamebases）：以避免延伸阶段聚合酶“滑动（PolymeraseSlippage）”。选择GC含量（GCC...

数字PCR是一种核酸分子定量技术。当前核酸分子的定量有三种方法，光度法基于核酸分子的吸光度来定量；实时荧光定量PCR（RealTimePCR）基于Ct值，Ct值就是指可以检测到荧光值对应的循环数；数字PCR是的定量技术，基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量，是一种定量的方法。主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法，将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。dPCR的结果...

全自动样本制备系统DMX-1000配备气流发生装置和气压控制装置，能够实现高精度压力控制，结合**产品液滴生成芯片和微流控乳液滴生成技术，DMX-1000可以在70秒内快速、稳定、高效地生成大小均一的微乳液滴。微滴数量可达2万-60万个，粒径范围30-120μm，性能稳定。除此之外，锐讯还提供微流控芯片的定制服务，以满足不同的液滴数目和尺寸要求。平板式快速扩增仪TC-1000，不再使用传统的96孔板，而是特制的液滴扩增芯片；不再是传统的“烧开水”加热模式，代之以平板式单液滴层均匀受热的方式。在这样的改进之下，TC-1000完成40个PCR循环只需约45分钟（TC-2.0升级版更是把时间缩短到了...

dPCR的结果统计方式有2种，一种是采用标记多种颜色，通过不同检测通道分辨不同颜色和强度，再根据分散液滴的数量计算待测基因的含量；另一种采用概率统计的数据处理方法，即通过泊松分布的方法对结果进行分析。应用概率统计分析数据和对数据处理方法的模型直接关系着结果的准确性和分析时间的长短。常用的统计方法是假设每个微反应单元的体积相同，根据泊松统计计算拷贝数，公式为：M=-Vx1n（1-x/）其中M是目标总拷贝数量；V是微反应单元数量；x是发光的微反应单元数量。经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。广东臻准数字PCR生命科学用品基于微滴的QX10...

作为时下的热点技术，数字PCR是将核酸样品分配到大量单独、平行的微反应单元（nL，纳升级别）中，使得每个反应单元中尽可能含有1个模板分子，并在此基础上进行扩增、检测和分布统计，从而实现靶标分子的比较 计数。（图：数字PCR技术原理）根据微反应单元的不同形式，数字PCR产品可分为微板式、微滴式和芯片式等。目前，市场上主要的数字PCR产品主要是基于微滴式和芯片式，如Bio-Rad公司的QX200微滴式系统和ThermoFisher公司的QuantStudio系统等。与一、二代PCR技术相比，数字PCR具有很多优势：一是特异性、灵敏性均有显著提高；二是在不依赖内参和标准曲线的前提下，可直接得到比较 ...

无创产前筛查有望成为数字PCR在临床快速落地的锏应用。首先，无创产前筛查领域对于兼顾成本、准确性、速度的创新技术的需求还未满足。其次，无创产前筛查市场空间庞大，虽说中国每年新生儿的增长速度正在放缓，但每年仍有超过1000万的新生儿，带来了巨大的想象空间。2022年6月，郑大一附院遗传与产前诊断中心、塔歌生物联合在JournalofTranslationalMedicine（影响因子5.531）杂志上发表文章，验证了数字PCR作为T21,T18和T13产前筛查方法的可行性，这是世界上报道在真实临床条件下通过盲检实现一管反应可从孕妇血浆样本中同时检测出T21、T18和T13的数字PCR无创产前筛查...

相比于qPCR，dPCR在转基因检测中具有以下优势：（1）检测灵敏度高：理论上dPCR的灵敏度可达1个拷贝，而实际应用中dPCR的小检出限和比较低定量限数值非常接近，所以dPCR可以在非常低的目标拷贝数下得到精确的结果；通常转基因比参考基因（内源基因）浓度低很多；（2）前处理简单且受基质成分干扰较小：dPCR反应效率和精密度受到食品基质成分干扰影响较小，可应用于混合基质样品中低丰度DNA的检测；（3）dPCR对抑制剂的敏感性较低：由于dPCR结果表示为“有荧光“或“无荧光”，即使存在抑制剂降低了荧光强度仍可以表示为“有荧光；（4）适合多重转基因检测：食品或饲料提取的DNA中可能包含多种转基因片...

二项式分布是一个离散概率分布，它给出了m次试验中k次成功的可能性，每次试验的概率为p，例如当掷骰子时，二项分布给出了在10次试验中恰好有7次掷出4的概率。在数字PCR的情况中，投掷骰子类似于将一个目标实体随机“投掷”到一组分区中，当目标落在选定的分区中时，就是成功。如果有n个分区，并且分区过程是完全随机的，则目标出现在所选分区中的概率为1/n。该试验重复m次，样品中的每个分子一次。更多关于PCR的相关信息，欢迎咨询广州双螺旋科学仪器有限公司。在患者术后复发检测中，数字PCR评估出的ctDNA阳性，可以早于影像学数月提前揭示出患者复发。华南地区臻准数字PCR油滴制造 PCR已成为分子诊断领域重要...

PCR（PolymeraseChainReaction）技术，即聚合酶连反应，是一种扩大和复制目的片段DNA的技术，其发现对于生命科学的发展具有重要的意义。而3D数字PCR到底是什么鬼？它其实是出现的一款PCR仪，其具有对目的DNA分子做出定量的优点，进而提供的准确性、灵敏度。应用该技术，实现对DNA进行精确定量，精确度可通过复制次数实现。通过准确性的进行定量检测基因，有助于临床上在、病毒等疾病作参考。同时，其具有高通量，检测速度快，成本相对低等优点，为后期精细奠定基础。相较于qPCR，数字PCR可让你能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的定量。苏州医疗系统认证数字PCR原理目前全球数字...

dPCR的测量结果通常表示为含量，即拷贝数值或转基因质量百分比，而QPCR结果通常表示为拷贝数的质量分数。目前市场上可购买到大多数转基因标准物质，以qPCR定值的标准物质是以拷贝数（单倍体基因组当量）的质量分数来表示特性量；以dPCR定值的标准物质直接采用拷贝数比例来表示特性量。不同方法使用不同的表示方式，会造成测量结果不可比。因此质量分数、拷贝数和拷贝数比例之间的关系需要转化，才能得到单位一致，数值可比的数据。EU联合研究中心建议使用转换因子从拷贝数换算到质量分数。模板 DNA 量越多，荧光达到域值的循环数越少，即 Ct 值越小。上海微滴式数字PCR市场前景基于微滴的QX100dPCR仪，利...

20世纪末，Vogelstein等提出数字PCR(digitalPCR，dPCR)的概念，通过将一个样本分成几十到几万份，分配到不同的反应单元，每个单元至少包含一个拷贝的目标分子(DNA模板)，在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增，扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析。PCR实际上是一个在模板DNA、引物(模板片段两端的已知序列)和四种脱氧核苷酸等存在的情况下，DNA聚合酶依赖的酶促合成反应，扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合。dPCR仪器在操作中集成了前处理以减少手工移液和样品转移的操作，增加了通量，并在价格上具有优势。华南地区一体化数字PCR分析应用数字聚合酶...

常规PCR和实时荧光PCR定量检测都需要已知拷贝数的标准DNA制定标准曲线，由于样品测定在各种条件上不会完全一致，会造成PCR扩增效率的差异，从而影响定量结果的准确性。而ddPCR不受标准曲线和扩增动力学影响，可以进行定量。如何在双通道设置及双探针标记的情况下实现多重检测?不同位点的双探针检测体系中引物和探针采用不同的终浓度，这样阳性微滴的终点FAM/HEX荧光信号强度就会不同，利用阳性微滴不同的“分簇(cluster)”来区分不同的突变位点。采用对应的KRAS野生型和突变型细胞系对双重ddPCR检测体系的性能进行验证。结果显示除了Q61H位点外，其他位点的检测体系在54C的情况下均能很好的区...

了解泊松分布，我们先要从二项式分布说起，二项式分布是一个离散概率分布，它给出了m次试验中k次成功的可能性，每次试验的概率为p，例如当掷骰子时，二项分布给出了在10次试验中恰好有7次掷出4的概率。在数字PCR的情况中，投掷骰子类似于将一个目标实体随机“投掷”到一组分区中，当目标落在选定的分区中时，就是成功。如果有n个分区，并且分区过程是完全随机的，则目标出现在所选分区中的概率为1/n。该试验重复m次，样品中的每个分子一次。如下所示的二项式分布给出了k个成功的概率，即所选分区恰好包含k个分子的概率。数字PCR通常采用大量分区。当n很大，并且尝试成功的概率(1/n)很小时，二项分布可以近似为泊松分布...

无创产前筛查有望成为数字PCR在临床快速落地的锏应用。首先，无创产前筛查领域对于兼顾成本、准确性、速度的创新技术的需求还未满足。其次，无创产前筛查市场空间庞大，虽说中国每年新生儿的增长速度正在放缓，但每年仍有超过1000万的新生儿，带来了巨大的想象空间。2022年6月，郑大一附院遗传与产前诊断中心、塔歌生物联合在JournalofTranslationalMedicine（影响因子5.531）杂志上发表文章，验证了数字PCR作为T21,T18和T13产前筛查方法的可行性，这是世界上报道在真实临床条件下通过盲检实现一管反应可从孕妇血浆样本中同时检测出T21、T18和T13的数字PCR无创产前筛查...

naica®六通道微滴芯片数字PCR系统，源于crystal微滴芯片数字PCR技术，自动化微滴生成和扩增，每个样本孔可实现6荧光通道的检测，智能化识别微滴并进行质控，3小时内即可获得至少6个靶标基因的一定程度上拷贝数浓度，融合传统微滴式和芯片式优势，被称为下一代数字PCR技术。只需一步移液操作，将PCR反应液加载于创新型微流控芯片，naica®六通道微滴芯片数字PCR系统即可自动生成单层平铺的2D微滴阵列，随后对每个微滴进行温度均匀一致的PCR扩增后，进行六通道荧光信号采集，计数阴阳性微滴，通过泊松分布计算获得靶标基因一定程度上拷贝数浓度。Drop-off数字PCR检测方法的**主要优势是能够...

作为时下的热点技术，数字PCR是将核酸样品分配到大量单独、平行的微反应单元（nL，纳升级别）中，使得每个反应单元中尽可能含有1个模板分子，并在此基础上进行扩增、检测和分布统计，从而实现靶标分子的比较 计数。（图：数字PCR技术原理）根据微反应单元的不同形式，数字PCR产品可分为微板式、微滴式和芯片式等。目前，市场上主要的数字PCR产品主要是基于微滴式和芯片式，如Bio-Rad公司的QX200微滴式系统和ThermoFisher公司的QuantStudio系统等。与一、二代PCR技术相比，数字PCR具有很多优势：一是特异性、灵敏性均有显著提高；二是在不依赖内参和标准曲线的前提下，可直接得到比较 ...

在精细诊疗领域，患者外周血中的循环DNA（ctDNA），在的早期筛查，围术期监测，药物疗效评估，预后等方面具有重要的临床应用价值。在肺液体活检领域，EGFR突变由于其在东亚人群中的高突变率,实现精细检测显得尤为重要。研究表明，相较于荧光定量PCR，数字PCR对于血液ctDNA的检测灵敏度更高（0.01%），EGFR突变的阳性检出率也更高。在患者术后复发检测中，数字PCR评估出的ctDNA阳性，可以早于影像学数月提前揭示出患者复发。因此，该项技术在肺精细诊疗中具有重要的作用。数字PCR应用前景广阔，可用于病原微生物检测、基因检测、无创产前筛查、测序结果验证等领域。广东进口数字PCR生命科学用品使...

目前dPCR主要有两种形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。可以使用几种不同的方法来分配样品，包括微孔板，毛细管，油乳剂和带有核酸结合表面的小型化腔室阵列。样品的分配使人们可以通过假设分子种群遵循泊松分布来估计不同分子的数量，根据泊松分布的原理，反应体系中目标分子的拷贝数可以通过公式A=-ln[(N-X)/N]*N计算，从而解决了多个目标分子存在于...

基于数字PCR技术平台，塔歌生物成功地开发了胎儿染色体非整倍体(T21,T18和T13)无创产前筛查试剂盒（数字PCR-NIPT），并已完成数百例临床样本验证。数字PCR-NIPT的阳性检出率和NGS相似，且成本接近血清学，可以在上述应急策略中取代血清学作为灵敏度和特异性更高的初筛方法，以有效提高阳性检出率，降低需要复筛的假阳性样本数和节省总的筛查成本。数字PCR应用前景广阔，可用于病原微生物检测、基因检测、无创产前筛查、测序结果验证等领域。但目前，大多数医院采购的数字PCR仪器是用于科研层面，在临床应用上仍处于起步阶段，未得到普遍应用。dPCR可直接溯源SI国际单位制摩尔，适合单一、双重及多...

使用ddPCR的一个主要优点在于，定量不是相对的。微滴式数字PCR计算事件的数量，因此可以确定检测极限和比较低起始量，以便达到所需的灵敏度。在连续监控或比较不同患者的效果时，这可以更准确地比较负荷，因为所测得的丰度不是相对的。经过实验证实，ddPCRKRASG12/G13ScreeningKit也能够检测患者cfDNA样品中的KRAS突变（图2）。这些患者的血浆样品购自ConversantBio和ProMedDx，之前已通过FFPE基因分型被分为KRAS突变阳性或阴性。欢迎咨询广州双螺旋科学仪器有限公司。20世纪末，Bert Vogelstein等提出数字PCR的概念。德国赛默飞数字PCR解决...

基于微滴的QX100dPCR仪，利用油包水技术，将样品平均分配到20000个微滴油包水中，利用微滴分析仪对微滴进行分析。2012年RainDance公司推出了RainDropdPCR仪，在高压气体驱动下，将每个标准反应体系分割成包含100万至1000万个皮升级别微滴的反应乳液。数字PCR就形成了2大派别，芯片式和微滴式。不论是哪种数字PCR，其原理都是有限稀释，终点PCR和泊松分布。将含有核酸模板的标准PCR反应体系，平均分配成几万个PCR反应，分配到芯片或微滴中，使每个反应中尽可能含有一个模板分子，进行单分子模板PCR反应，通过读取荧光信号的有或无进行计数，经过统计学泊松分布的校准进行定量。...

企业宗旨：成为数字PCR的，更好地服务于体外诊断行业，让检测更简单！企业价值观：用户，质量为本；潜力而为，主动开拓；高效执行，负责到底。发展历程：2016年，企业成立2017年，数字PCR系统研制成功2018年，产品线成熟2019年，生产线建成“让检测，更简单”。臻准生物诚挚邀请您莅临展会现场，洽谈合作、共赢未来！作为华南地区备受举荐的专业平台，BTE始终以昂首积极的姿态迎接数万专业人士，携手生物技术行业从业者共同探讨行业发展新机遇。多年来，BTE始终时刻探索业界风向，吸纳行业前沿资源，不忘宗旨，锐意开拓，正围绕粤港澳大湾区生物行业产业群的协同发展交流与融合打造一个高水平科技创新载体和平台。通...