数字PCR基本参数
  • 品牌
  • 臻准、锐讯生物
  • 型号
  • DropDx-2044数字PCR系统、 AccuONE系列
  • 类型
  • pcr仪
数字PCR企业商机

在精细诊疗领域,患者外周血中的循环DNA(ctDNA),在的早期筛查,围术期监测,药物疗效评估,预后等方面具有重要的临床应用价值。在肺液体活检领域,EGFR突变由于其在东亚人群中的高突变率,实现精细检测显得尤为重要。研究表明,相较于荧光定量PCR,数字PCR对于血液ctDNA的检测灵敏度更高(0.01%),EGFR突变的阳性检出率也更高。在患者术后复发检测中,数字PCR评估出的ctDNA阳性,可以早于影像学数月提前揭示出患者复发。因此,该项技术在肺精细诊疗中具有重要的作用。数字PCR应用前景广阔,可用于病原微生物检测、基因检测、无创产前筛查、测序结果验证等领域。广东进口数字PCR生命科学用品

使用ddPCR的一个主要优点在于,定量不是相对的。微滴式数字PCR计算事件的数量,因此可以确定检测极限和比较低起始量,以便达到所需的灵敏度。在连续监控或比较不同患者的效果时,这可以更准确地比较负荷,因为所测得的丰度不是相对的。经过实验证实,ddPCRKRASG12/G13ScreeningKit也能够检测患者cfDNA样品中的KRAS突变(图2)。这些患者的血浆样品购自ConversantBio和ProMedDx,之前已通过FFPE基因分型被分为KRAS突变阳性或阴性。欢迎咨询广州双螺旋科学仪器有限公司。德国微滴式数字PCR系统目前dPCR中体积优化方法以光学显微镜观测为主。

20世纪末,Vogelstein等提出数字PCR(digitalPCR,dPCR)的概念,通过将一个样本分成几十到几万份,分配到不同的反应单元,每个单元至少包含一个拷贝的目标分子(DNA模板),在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增,扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析。PCR实际上是一个在模板DNA、引物(模板片段两端的已知序列)和四种脱氧核苷酸等存在的情况下,DNA聚合酶依赖的酶促合成反应,扩增的特异性取决于引物与模板DNA的特异结合。

ThermoFisherQuantStudio3D是另一个经典的芯片式数字PCR平台,其基本的检测流程是:将反应液加入到涂布器中,通过涂布器将反应液均匀涂布在有20000个微孔的芯片上,将芯片放在PCR仪上扩增,将芯片放入读取仪中采取拍照的方式读取荧光信号。操作较为复杂,整个过程在封闭的芯片中进行,污染的风险较低。STILLANaica是一个较新的数字PCR平台,基本的检测流程是:将反应液加入芯片,将芯片放入微滴生成扩增系统,生成30,000个微滴单层平铺于芯片中,PCR扩增在芯片上完成。然后将扩增后的芯片转移至微滴阅读分析系统,采取拍照的方式读取荧光信号。由于整个过程在封闭的芯片中进行,污染的风险较低。数字PCR是直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的定量。

数字PCR是一种核酸分子定量技术。当前核酸分子的定量有三种方法,光度法基于核酸分子的吸光度来定量;实时荧光定量PCR(RealTimePCR)基于Ct值,Ct值就是指可以检测到荧光值对应的循环数;数字PCR是的定量技术,基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量,是一种定量的方法。主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法,将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中,每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后,有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号,没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积,就可以推算出原始溶液的核酸浓度。在数字PCR赛道,塔歌生物将加速胎儿染色体非整倍体无创产前筛查注册证的申报。美国进口数字PCR

相同模板进行 96 次扩增,终点处产物量不恒定,但 Ct 值却极具重现性。广东进口数字PCR生命科学用品

作为时下的热点技术,数字PCR是将核酸样品分配到大量单独、平行的微反应单元(nL,纳升级别)中,使得每个反应单元中尽可能含有1个模板分子,并在此基础上进行扩增、检测和分布统计,从而实现靶标分子的比较 计数。(图:数字PCR技术原理)根据微反应单元的不同形式,数字PCR产品可分为微板式、微滴式和芯片式等。目前,市场上主要的数字PCR产品主要是基于微滴式和芯片式,如Bio-Rad公司的QX200微滴式系统和ThermoFisher公司的QuantStudio系统等。与一、二代PCR技术相比,数字PCR具有很多优势:一是特异性、灵敏性均有显著提高;二是在不依赖内参和标准曲线的前提下,可直接得到比较 量化指标;三是微反应单元相互独立、封闭,避免了PCR抑制剂及不同核酸分子扩增产物间的相互干扰,准确度和可重复性较高。广东进口数字PCR生命科学用品

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