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作为时下的热点技术,数字PCR是将核酸样品分配到大量单独、平行的微反应单元(nL,纳升级别)中,使得每个反应单元中尽可能含有1个模板分子,并在此基础上进行扩增、检测和分布统计,从而实现靶标分子的比较 计数。(图:数字PCR技术原理)根据微反应单元的不同形式,数字PCR产品可分为微板式、微滴式和芯片式等。目前,市场上主要的数字PCR产品主要是基于微滴式和芯片式,如Bio-Rad公司的QX200微滴式系统和ThermoFisher公司的QuantStudio系统等。与一、二代PCR技术相比,数字PCR具有很多优势:一是特异性、灵敏性均有显著提高;二是在不依赖内参和标准曲线的前提下,可直接得到比较 量化指标;三是微反应单元相互独立、封闭,避免了PCR抑制剂及不同核酸分子扩增产物间的相互干扰,准确度和可重复性较高。数字PCR具有诸多优点,但也存在一定的不足,如成本高、仪器操作复杂、经济效益低等。华南地区全自动数字PCR价格
数字PCR技术是继一代普通PCR、二代荧光定量PCR之后的第三代PCR技术。该技术将一个样本分成几到几十万份,分配到不同的反应单元,每个单元包含一个或多个拷贝的目标分子(DNA模板),在每个反应单元中分别对目标分子进行PCR扩增;扩增结束后,将有荧光信号的微滴判读为1,没有荧光信号的微滴判读为0,终根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例,计算出待检靶分子的浓度或拷贝数。定量:不再依赖于Ct值和标准曲线,直接给出靶序列的起始浓度,实现真正意义上的定量。更高灵敏度与特异性:数字PCR可实现万分之一稀有样本的定量,可用于极微量核酸样本检测、复杂背景下的稀有突变检测、表达量微小差异鉴定、单细胞基因表达等方面。数字PCR在分子诊断领域将会发挥巨大的作用,数字PCR适用于生物标志物研究、拷贝数变异分析、微生物检测、转基因生物检测、mRNA和miRNA检测、基因相对表达研究等,并对遗传病、、产前诊断的研究提供了一种全新的技术思路与手段,具有广的、不可替代的应用前景。深圳医疗系统认证数字PCR试剂盒我国数字PCR市场的整体规模、公司影响力、行业话语权等也将迎来进一步提升,从而助推行业高质量创新发展。
数字PCR系统通过其独特的微流体阵列式芯片板(MAP)技术,提供强大而易于使用的数字PCR体验。这种专有技术可实现对样品进行一致的自动腔室化,可将一份样品腔室化至20,000个微反应室,其变异系数(CV)达到比较好的<1%。与其它数字PCR系统不同,MAP技术不使用乳液或其它基于液滴的方法对反应进行腔室化。而是利用分配通道将试剂递送至微反应室,具有高精密度和一致性。此外,QuantStudioAbsoluteQ系统可分析加载样品的95%以上,确保获得高度准确的数字PCR结果。
目前全球数字PCR的市场规模约1.5亿-2.5亿美元,约占荧光定量PCR市场规模(约20亿美元)的10%,但增长趋势明显,有望逐步替代荧光定量PCR技术。目前国际市场有伯乐、赛默飞、凯杰、Stilla、罗氏等主要数字PCR玩家。根据MordorIntelliaence研究报告预测,2019-2024年全球qPCR和dPCR市场将以8.8%的年复合增长率增长,从2014年的41.13亿美元增长到2024年的62.7亿美元。其中,dPCR的增速更快达11.9%,将从2014年的4.75亿美元,增长到2024年8.34亿美元,为PCR检测带来极大的市场。但其预测的发展趋势仍有参考价值。数字PCR的**原理:有限稀释、终点PCR和泊松分布。
数字PCR的引物和探针设计规则同荧光定量PCR是类似的,具体规则如下:1、查找和选择目标序列设计引物和探针的第一步是得到感兴趣基因的核酸序列。找到基因保守区域:基因的保守区域是指来自同一属/种/亚型的、在某个基因上碱基序列差别很小或没有差别的区域。根据需要,使用ClustalX或ClustalW等软件对齐属于同一属/种/亚型的基因的一组序列,在对齐序列的保守区域设计引物,并确保引物结合位点处的保守序列与其它非待检测的属/种/亚型的碱基序列具有较大的差异。扩增产物长度(AmpliconLength):可在75-200bp之间(产物长度=下游引物位置-上游引物位置+1)。dPCR的测量结果通常表示为含量,即拷贝数转基因质量百分比,而QPCR结果通常表示为拷贝数的质量分数。珠三角一体化数字PCR
无创产前筛查有望成为数字PCR在临床快速落地的应用。华南地区全自动数字PCR价格
相比于cPCR技术和第二代qPCR技术,dPCR技术具有定量,可溯源至SI国际单位制摩尔;基质成分干扰较小[51];灵敏度高;对抑制剂的敏感性较低;适合多重转基因检测[52.53],可提高分析效率;实验条件优化简单[54]对实验条件优化的要求较低,适合多重基因检测等优势,可为转基因农作物提供准确的量值保证,目前dPCR仪器的价格仍然十分昂贵,但随着系统加工工艺的改进以及使用较便宜的材料,聚合成更小的体积[556],其价格将会不断的降低,使其应用到更多的检测中。华南地区全自动数字PCR价格
双螺旋科学仪器,2015-04-17正式启动,成立了数字PCR,纯水机,病理切片机,倍性分析仪等几大市场布局,应对行业变化,顺应市场趋势发展,在创新中寻求突破,进而提升臻准,美国艾科浦,锐讯生物,Sysmex,Eprerdia的市场竞争力,把握市场机遇,推动精细化学品产业的进步。双螺旋科学仪器经营业绩遍布国内诸多地区地区,业务布局涵盖数字PCR,纯水机,病理切片机,倍性分析仪等板块。我们强化内部资源整合与业务协同,致力于数字PCR,纯水机,病理切片机,倍性分析仪等实现一体化,建立了成熟的数字PCR,纯水机,病理切片机,倍性分析仪运营及风险管理体系,累积了丰富的精细化学品行业管理经验,拥有一大批专业人才。双螺旋科学仪器始终保持在精细化学品领域优先的前提下,不断优化业务结构。在数字PCR,纯水机,病理切片机,倍性分析仪等领域承揽了一大批高精尖项目,积极为更多精细化学品企业提供服务。
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