德国医疗系统认证数字PCR原理

微滴数字PCR主要是将两种互不相溶的液体，以其中一种作为连续相（油），另一种作为分散相（水），在水/油两相表面张力和剪切共同作用下分散相以微小体积单元的形式存在于连续中，从而成液滴。这种液滴式的反应腔室具有体积小、样品间无扩散等优势。在ddPCR中，利用微滴发生器可以一次生成数万乃至百万个纳升甚至皮升级别的单个油包水微滴，作为数字PCR的样品分散载体。这里，液滴中包裹了单拷贝DNA模板和PCR反应液，然后将液滴收集在PCR反应管中进行扩增。PCR反应结束后检测每个微滴的荧光信号。目前Bio-Rad公司的QX100系统、QX200系统均为采用液滴技术的数字PCR系统。图6.Bio-Rad的液滴数字PCR系统通过数字PCR技术可建立多重荧光体系，用于同时检测比如非小细胞中常见的MET和HER2耐药扩增。德国医疗系统认证数字PCR原理

数字PCR系统通过其独特的微流体阵列式芯片板（MAP）技术，提供强大而易于使用的数字PCR体验。这种专有技术可实现对样品进行一致的自动腔室化，可将一份样品腔室化至20,000个微反应室，其变异系数（CV）达到比较好的<1%。与其它数字PCR系统不同，MAP技术不使用乳液或其它基于液滴的方法对反应进行腔室化。而是利用分配通道将试剂递送至微反应室，具有高精密度和一致性。此外，QuantStudioAbsoluteQ系统可分析加载样品的95%以上，确保获得高度准确的数字PCR结果。上海双螺旋生物仪器数字PCR市场前景Drop-off数字PCR检测方法的**主要优势是能够能够在一个反应中检测到基因组序列范围短的同源基因突变。

PCR常使用目标序列的拷贝数或某一给定样品中转基因的百分比来体现方法灵敏度。由于qPCR和dPCR实验过程所用试剂的兼容性较好，在使用dPCR进行转基因检测时，通常直接参照qPCR的方法。使用不同技术对相同样品检测时，两种方法的灵敏度是否具有可比性成为关注的问题。Burns等21]使用Fluidigm公司的12.765（12板，每板765个微单元）芯片数字PCR分析仪测定标准物质ERM-AD413检测转基因玉米MON810。该小组应用dPCR技术评估在qPCR定义下的灵敏度数值，在拷贝数200-700之间，dPCR与qPCR的测量结果具有一致性。但与qPCR的灵敏度相比，dPCR在低于拷贝数200时有被低估的风险，在高于拷贝数1000时有被高估的风险。dPCR在同一阵列上同时测量转基因和内源性靶点时，需要稀释内源性靶点和转基因靶点在合理拷贝数范围内以保证dPCR测量结果的准确性。

数字PCR系统的分散方式决定了分散数量，其结果基于统计的方法进行定量，增加反应单元数量（统计样本量），可以增加其检测的容量和动态检测线性范围达到和qPCR相近的动态范围，同时减小一个反应单元中包含多个分子所造成的误差，达到提高灵敏度和准确度。影响dPCR定量结果的因素包括：仪器采用的分散方式与数量、溶液稀释方法、分散体积的准确性以及结果表达方式。分散方式与数量由数字PCR系统决定，分散体积和结果表达方式需要实验人员在实验过程中优化得到。数字PCR主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法。

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国产dPCR企业在上述应用领域不断与伯乐、赛默飞、罗氏、凯杰、因美納等头部企业展开竞争，抢占市场份额。德国医疗系统认证数字PCR原理

面对日益严格的限量标准和可预期降低的仪器购置成本，数字PCR将在食品检测领域起到越来越重要的作用：同时，数字PCR技术带来的量值的溯源方式，也将成为转基因标准物质的主要研究方向。发展dPCR协同分析和自动化程度，使其具有更好兼容性、更低廉的成本，可使数据结果不间断地纳入到全食品安全全产业链中，从而在未来的食品检测中得到更广的应用。dPCR多重检测可在不使用标准曲线的情况下，在同一分析过程中同时测定单一或多个转基因与参考基因的比率，提高检测的效率节省重复操作。德国医疗系统认证数字PCR原理

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