自噬基本参数
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自噬企业商机

生理条件下,PINK1前体在内质网中合成后,凭借N端的线粒体定位序列被线粒体外膜转运酶识别并转入线粒体基质。当PINK1进入线粒体基质后,其N端信号肽被降解为成熟的PINK1,成熟的PINK1进入线粒体基质后被蛋白酶体识别清chu,从而维持基础水平。而线粒体受损时,线粒体膜电位发生变化,线粒体外膜去极化,阻碍PINK1进入线粒体,同时对PINK1的降解能力下降。因此,有活性的PINK1可以稳定聚集在线粒体外膜蛋白上,从而募集并激huoParkin,使其磷酸化。磷酸化的Parkin可以泛素化线粒体受体蛋白,后者泛素化后可与自噬受体调节蛋白等结合,形成泛素化的线粒体,从而激huo泛素相关的蛋白酶体途径,实现线粒体降解。白藜芦醇可诱导H9c2细胞自噬,其通路可能与激huo的p38MAPK相关。江西细胞自噬Beclin1

细胞经诱导或阻止后,需对自噬过程进行观察和检测,常用的策略和技术有:观察自噬体的形成。由于自噬体属于亚细胞结构,普通光镜下看不到,因此,直接观察自噬体需在透射电镜下。Phagophore的特征为:新月状或杯状,双层或多层膜,有包绕胞浆成分的趋势。自噬体(AV1)的特征为:双层或多层膜的液泡状结构,内含胞浆成分,如线粒体、内质网、核糖体等。自噬溶酶体(AV2)的特征为:单层膜,胞浆成分已降解。我们在显微镜成像后红绿荧光merge后通过merge后出现的黄色斑点即只是自噬体.红色的斑点指示自噬溶酶体,通过不同颜色斑点的计数可以清晰的看出自噬流的强弱。江西细胞自噬Beclin1剧烈运动下的自噬会增加生长因子,从而加速肌肉修复。

 GFP-LC3病毒系统可高效ganran目的细胞,表达GFP-LC3,ganranganran后细胞可在荧光显微镜下实时观察自噬的整体水平;由于电镜耗时长,不利于监测自噬形成。我们利用LC3在自噬形成过程中发生聚集的现象开发出了GFP-LC3指示技术:无自噬时,GFP-LC3融合蛋白弥散在胞浆中;自噬形成时,GFP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜,在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点,一个斑点相当于一个自噬体,可以通过计数来评价自噬活性的高低。研载生物已开发出高效的评价用GFP-LC3病毒载体,通过瞬时高效ganran细胞,配合活细胞工作站成功评价自噬流。

自噬是细胞内的一种「自食(Self-eating)」的现象,凋亡是「(Self-killing)」的现象,二者共用相同的刺激因素和调节蛋白,但是诱发阈值和门槛不同,如何转换和协调目前还不清楚。自噬是指膜(目前来源还有争议,大部分表现为双层膜,有时多层或单层)包裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等形成自噬体(autophagosome),结尾与溶酶体融合形成自噬溶酶体(autophagolysosome),降解其所包裹的内容物,以实现细胞稳态和细胞器的更新。损坏细胞死亡时,自噬为新的细胞进入并接管提供了空间。

目前认为,自噬体的膜不是直接来源于高尔基体或内质网,而是在胞浆中重新生成的,但具体的机制尚不清楚。当beclin-1被活化后,胞浆中先形成比较多个membranesource(自噬体膜发生中心),在它们不断扩展的过程中,VMP1蛋白由内质网和高尔基体转位到自噬体膜上(VMP1又叫TMEM49,已知唯独与自噬有关的跨膜蛋白),同时,MAP1-LC3由胞浆型(即LC3-I)转位到自噬体膜(即LC3-II),LC3这一转变过程可被WesternBlot和荧光显微镜检测到,现已成为监测自噬体形成的推荐方法。UA可引导粒线体的自噬作用,并防止有功能障碍粒线体的累积。在囓齿动物理,UA可经由粒线体引发增进运动能力,这些新的发现建议UA在增进粒线体和肌肉功能方面有医药潜力。推动关系中自噬并不直接参与诱导细胞死亡,而是作为能量供应者保障凋亡顺利进行。江西细胞自噬Beclin1

THC可通过抑制细胞自噬途径改善Hhcy小鼠脑缺血损伤。江西细胞自噬Beclin1

肝病中瘤免疫与自噬的关系尚未完全明确。研究表明,缺乏自噬的肝脏Kupffer细胞可以通过mtROS-NF-κB-IL-1a/b通路促进肝硬化和肝病发展。自噬缺陷协同脂质堆积可造成肝内CD4+T淋巴细胞耗竭。细胞自噬还被证实可被诱导增强TGFβ介导的抗瘤作用,IFNγ可通过非凋亡性细胞死亡抑制Huh7肝病细胞增殖,敲除自噬后,IFNγ抑制肝病细胞增殖和诱导肝病细胞死亡的作用消失。研究表明自噬可通过抑制抑病基因的表达或活化原病基因促进肝病发生。在ATG5敲除的小鼠模型中,由于自噬缺陷,抑病基因p53表达增加,小鼠只发生肝良性瘤而不恶变。这进一步提示,自噬在肝病发生中的作用及机制非常复杂,可能受到诸多因素调控,但其重要性则毋庸置疑,仍需更多的研究探索其机制。江西细胞自噬Beclin1

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