蛋白芯片制作

抗体芯片实验室服务思考留给科研，实验外包出去！抗体芯片是蛋白芯片的一种，具有微型化、集成化、高通量化的特点，可以用于检测某一特定的生理或病理过程相关蛋白的表达丰度，目前主要用于信号转异、蛋白质组学、肿块物及其他疾病的相关研究。抗体芯片检测的样本类型包括提取物、细胞培养上清、血清血浆等，检测的方式通过生物素标记的方法完成样本标记，然后芯片孵育，样本中相关蛋白与芯片上特异性抗体结合，通过荧光的方式使用芯片扫描仪检测。实验获得的数据将通过标准的数据处理流程进行分析。抗体芯片检测的优点：灵敏度高、特异性好、重复性佳、准确性高抗体芯片的检测内容包括：抗体芯片主要用于蛋白表达谱、蛋白质磷酸化及蛋白质相互作用等检测本panel可检测以下因子：GM-CSF,IFN-γ,IL-10,IL-2,IL-4,IL-6,IL-8/CXCL8,TNF-α 种属：Human。蛋白芯片制作

产生组织切片非特异性染色的原因有哪些？如何解决？1)、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是尤其重要的一条。2)、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体看看。3)、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；4)、非特异性组分与抗体结合，这需要通过延长二抗来源的动物免疫血清封闭时间和适当增加浓度来加强封闭效果；5)、DAB孵育时间过长或浓度过高；6)、PBS冲洗不充分，残留抗体结果增强着色，在一抗/二抗/SP孵育后的浸洗尤为重要；7)、标本染色过程中经常出现干片，这容易增强非特异性着色。ppar脂代谢信号通路本panel可检测以下因子：IFN-γ,IL-1β,IL-2,IL-4,IL-5,IL-10,IL-12p70,IL-13,KC/GRO,TNF-α 种属：Mouse。

酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。基本原理：它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于订量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单，方便迅速，特异性强。

1)除了蛋白，LUMINEX技术是否还可以用于其它指标的检测？可以用于基因表达，基因多态性和HLA配型分析。2)如何判定LUMINEX数据表达水平差异有无意义？表达差异主要取决于标本的性质和数量，我们公司为客户提供专业的数据统计服务。3)LUMINEX实验和流式细胞仪的优劣比较?Luminex技术是流式细胞仪和微球相结合的蛋白、核酸检测技术，检测对象是蛋白质、DNA等大分子。普通流式细胞仪主要用于检测整体细胞表面或细胞内的蛋白表达情况。Luminex检测蛋白和标本数目大，是一种高通量检测技术。普通流式细胞仪每次只能检测几种蛋白分子，而且检测速度较慢，不适合高通量分析。由此可见，两种方法应用方向有很大差别。4)如何控制LUMINEX检测的质量？我们对每一次检测都设定标准曲线，并设定内参进行校正。我们会定期做仪器校正，检测精密度和重复性实验以确保检测结果的可靠性。本panel可检测以下因子：sCD14,sCD26,Endostatin,pGRN,LRG1,MCAM/sCD146,ucMGP 种属：Human。

液态流式技术(Luminex)特点:多重检测：理论上可同时检测100种生物靶标。节省样品：只需低至25μl的样品体积。高灵敏度：精确定量下限低至0.1pg/mL。应用范围应用领域：免疫、炎症、心血管疾病、肿块物研究、肾、代谢、神经、细胞间作用。分析物类型：细胞因子、炎症因子、趋化因子、粘附因子、脂肪因子、血管生成蛋白、肿块物标记物、基质金属蛋白酶、基质金属蛋白酶抑制剂。其他应用：信号通路、重大疾病相关、Biomarker开发、临床应用。本panel可检测以下因子：CD276/B7-H3,GITRL/TNFSF18,PD-L1 (epitope 1),PD-L2 种属：Human。流式细胞分选的原理和特点

本panel可检测以下因子：α-2-macroglobulin,CRP,Haptoglobin,SAP 种属：Human。蛋白芯片制作

肿块物（瘤类）发病机制中的细胞因子（内源性及相关功能）：Il-1（白介素1）：肿块物侵袭和血管生成所必需的IL-6（白介素6）：化学诱导的淋巴瘤所需IL-12（白介素12）：抑制化学致肿块物作用IL-15（白介素15）：促进自然杀伤T细胞白血病IFN-γ：抑制化学致肿块物作用；抑制淋巴瘤；Stat1和Rag2抑制肿块物M-CSF：促进乳腺肿块物侵袭GM-CSF：抑制淋巴瘤和肿块物TNF-α：化学诱发的皮肤肿块物所需MIF：抑制p53肿块物抑制功能TGF-β：抑制结肠肿块物Fas-Fasligand：抑制淋巴瘤发生蛋白芯片制作

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