配制培养基应遵循的几个原则:1、目的明确:培养不同的微生物必须采用不同的培养条件;培养目的不同,原料的选择和配比不同;2、营养协调:微生物细胞组成元素的调查或分析,是设计培养基时的重要参考依据,微生物细胞内各种成分间有一较稳定的比例。3、理化适宜:指培养基的pH值、渗透压、水活度和氧化还原电势等物理化学条件较为适宜。4、经济节约:配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成份,特别是在发酵工业中,以降低生产成本。培养基的过滤澄清液体培养基必须澄清,琼脂培养基也应透明无明显沉淀。安徽进口培养基制备器
培养基的制备原则和要求:培养基是根据各类微生物生长繁殖的需要,用人工方法把多种物质混合而成的营养物。一般用来分离、培养菌类。常用的培养基有基础培养基、增菌培养基、选择培养基、鉴别培养基和厌氧培养基。在制备培养基时,应掌握如下原则和要求:(一)培养基必须含有细菌生长繁殖所需要的营养物质。所用的化学药品必须纯净,称取的份量务必准确。(二)培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。按各种培养基要求准确测定调节pH值。多数细菌生长的适宜pH值为7.2~7.6,呈弱碱性。中国台湾全自动培养基制备器培养基制备器试管塞不要塞得太紧(使用硅胶塞的时候),勿使用橡皮塞。
培养基配制--称量:培养基的制备环节,应当严格按照培养基配方制备,在培养基的称量过程中,建议在干爽、无风的区域或者通风柜中进行,这样能够避免培养基吸潮使称量结果不准。应当选择灵敏度较高的称重天平,这样能够保证称量的准确性,同时称量过程中要选择的称量匙,避免其他杂质混入培养基中。操作人员应当对称量过程进行详细的记录,记录中应该体现培养基名称、批号、称量数量、具体配制方法、制备人姓名日期、复核人姓名日期等信息,方便后期的溯源调查。
培养基配制:配制用水,培养基的大部分是水,所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准,水的电阻应为200万欧姆,一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。培养基:培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2-7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。血清:培养中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。培养基制备器都是微处理器控制的,而且灭菌之后保持的温度是可以预设的。
在制备培养基时,通常要考虑以下因素:(1)pH值多数细胞系在pH=7.4下生长得很好。尽管各细胞株之间细胞生长*pH值变化很小,但一些正常的成纤维细胞系以pH=7.4~7.7,转化细胞以pH=7.0~7.4更合适。据报道,上皮细胞以pH=5.5合适。为确定*佳pH值,做一个简单的生长实验或特殊功能分析酚红常用作指示剂,pH=7.4呈红色,pH=7.0变橙色,pH=6.5变黄色,而pH=7.6呈红色中略带蓝色,pH=7.8呈紫色。由于对颜色的观察有很大的主观性,因而必须用无菌平衡盐溶液和同样浓度的酚红配一套标准样,放在与制备培养基相同的瓶子中。(2)缓冲能力碳算盐缓冲系统由于毒性小、成本低、对培养物有营养作用,因此比其他缓冲系统用得多。在pH值条件下的缓冲能力差。(3)渗透压多数培养细胞对渗透压有很宽的耐受范围,一般常用冰点降低或蒸汽压升高测定。如果自己配培养基,可通过测定渗透压防止称量和稀释等造成的误差。半合成培养基在合成培养基中,加入某种或几种天然成分。河北培养基制备器供应商
培养基的分装:培养基的分装,应按使用的目的和要求,分装于试管、烧瓶等适当容器内。安徽进口培养基制备器
微生物检验培养基制备的要点:培养基灭菌处理:分装完成的培养基应马上灭菌。其杀毒灭菌方式主要有三种类型:高压蒸汽灭菌方式,此方法可用于大多数耐热培养基。对于小份:使用121°C十五分钟;大份:121°C三十分钟;对于含碳水化合物的中.海培养基,需113~115°C十五分钟。灭菌以避免糖分的破坏。煮沸灭菌法方式,此方法可用于含有不耐高温物质的培养基。过滤除菌方式,过滤除菌,采用无菌技术定量添加培养基。血液和可以用无菌技术抽取并加入冷却至约五十度的培养基中。当中'海培养基中含有不耐热物质时可以使用此方法。安徽进口培养基制备器
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