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    我们将与LgBiT具有极强亲和作用的。HiBiT作为一种易于检测且具有高灵敏度的蛋白质标签，具有多种功能，例如当与基于CRIPSR的标签一起使用时，可以创建内源性报告基因模型。[1]2020Lumit™技术随着NanoBiT®技术的发展，人们认识到可以利用该系统通过结合免疫测定的组分检测多种分析物。由此产生的平台（现称为“Lumit”）提供了具有高灵敏度的简化免疫检测法。萤光素酶（英语：Luciferase）是自然界中能够产生生物发光的酶的统称，其中**有代表性的是一种学名为Photinuspyralis的萤火虫体内的萤光素酶。在相应化学反应中，荧光的产生是来自于萤光素的氧化，有些情况下反应体系中也包括三磷酸腺苷（ATP）。没有萤光素酶的情况下，萤光素与氧气反应的速率非常慢，而钙离子的存在常常可以进一步加速反应（与肌肉收缩的情况相似）。萤光生成反应通常分为以下两步：萤光素+ATP→萤光素化腺苷酸（luciferyladenylate）+PPi萤光素化腺苷酸+O2→氧萤光素+AMP+光这一反应非常节省能量，几乎所有输入反应的能量都被转化为光。与之形成鲜明对比的是人类使用的白炽灯，只有约10%的能量被转化为光，剩余的能量都变为热能而被浪费。萤光素或萤光素酶不是特定的分子。D-荧光素钾盐长期保存是有效期一年。无锡D-荧光素钾盐生物公司

    室温培育30min后加入细胞孔板中，置于培养箱常规培养。2)单克隆细胞筛选转染24h后胰酶消化细胞并按1∶6比例接种到新6孔板中，同时加入实验确定的浓度G418，随后每2d更换一次培养基并维持G418筛选直至单细胞抗性克隆的出现。分别挑选单一抗性克隆至96孔板，待其逐渐增殖后转入24孔板中继续传代培养。3)荧光素酶活性鉴定阳性克隆单一抗性克隆传代至第五代时用LuciferaseAs-sayAystem检测荧光素酶活性。检测时，各克隆按1×105个/孔接种到24孔板，24h后细胞裂解液裂解12000rpm，4℃离心10min，收集裂解物，取上清10μl加入96孔白板中，向每孔加入50μl荧光素酶96microplateluminometer连续读底物，停留2s后，取10s的荧光值（RLU），每个克隆设3个复孔，保留RLU值高的细胞克隆继续传代培养，再过5代后进行荧光素酶活性检测。保留RLU值维持较高的克隆直至第30代，荧光素酶活性更高的几个克隆MCF-7-luc即为阳性克隆.各不同数量细胞克隆的荧光值检测7-luc阳性克隆细胞按细胞数将筛出的MCF-4×104、2×104、1×104、5000、2500、1250、625、312和156分别接种到96孔黑板中，另外一组只有细胞，一组只有培养基作对照，设置2个复孔，常规培去上清并用PBS洗两次。徐州专业做D-荧光素钾盐发射波长D-荧光素钾盐短期保存条件是4℃干燥避光。

    荧光素钠[1]，橙红色粉末，无气味，有吸湿性；易溶于水，溶液呈黄红色，并带极强的黄绿色荧光，酸化后消失，中和或碱化后又出现，微溶于乙醇；比较大吸收波长(水)。基本信息药品名称荧光素钠拼音名Yingguangsuna英文名FLUORESCEINSODIUM来源(分子式)与标准本品为9-(邻羧基苯基)-6-羟基-3H-吨-3-酮二钠盐。按干燥品计算，含C20H10Na2O5不得少于。类别诊断用药。剂量滴眼2%溶液贮藏密封保存。制剂荧光素钠注射液2化学性质编辑中文名称：荧光素钠中文别名：荧光黄钠;荧光橙红钠;荧光素二钠英文名称：FluoresceindisodiumsaltCAS号：518-47-8[2]荧光素钠分子式：C20H10Na2O5分子量：等级：BSMDL号：MFCD00167039Beilstein号：3833041EC号：208-253-0荧光素钠[1]3性状描述编辑本品为橙红色粉末；无臭，几乎无味；有引湿性。本品在水中易溶，在乙醇中略溶。橙红色粉末，无气味，有吸湿性；易溶于水，溶液呈黄红色，并带极强的黄绿色荧光，酸化后消失，中和或碱化后又出现，微溶于乙醇；比较大吸收波长(水)。4检查资料编辑氯化物取本品，分取溶液10ml，依法检查（附录ⅧA），与标准氯化钠溶液制成的对照液比较，不得更浓（）。硫酸盐取上述氯化物项下剩余的溶液25ml，依法检查。

    从而实时监测疾病发展状态或药物的***功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。,PotassiumSalt/D-荧光素钾盐分子式：NaC11H7N2O3S2·H2O分子量：g/mol纯度：高级纯（）应用：1）活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析；2）***用于报告基因分析，免疫分析和ATP荧光卫生监测分析；Protocol1：InVitroBioluminescentAssays/体外生物发光检测1）配制成100mM的储存液（200×，浓度30mg/ml）。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。2）用预热好的组织培养基1∶200稀释储存液，配制工作液(终浓度150μg/mL)。3）去除培养细胞的培养基直至无残留。4）图像分析前立即向细胞内添加1×荧光素工作液，然后进行图像分析（或者细胞放在37℃短时间孵育后检测可增强信号）。D-荧光素钾盐注：萤光素、萤光素酶、萤火虫萤光素酶、萤光素钾盐、萤光素钾盐盐也经常被称作荧光素、荧光素酶、萤火虫荧光素酶、荧光素钾盐、荧光素钠盐。Protocol2：Invivoanalysisinmice/小鼠***成像分析1）用无菌的DPBS（w/oMg2+、Ca2+）配制D-荧光素钾盐溶液(15mg/mL)，。一旦使用，保持冰冷且避光。做D-荧光素钾盐测试真的靠谱吗？

    可用荧光素酶检测系统灵敏方便地测定荧光素酶基因的表达。荧光素酶报告基因有许多优点：①非放射性；②比CAT及其他报告基因速度快；③比CAT灵敏100倍；④荧光素酶在哺乳细胞中的半衰期为3小时，在植物中的半衰期为3．5小时。由于半衰期短，故启动子的改变会即时导致荧光素酶活性的改变，而荧光素酶不会积累。相反，CAT在哺乳细胞中的半衰期为50小时。荧光素酶浓度在10—16mol/L（10pS/L）到10-8mol/L（1mg/L）范围内，荧光信号强度与酶浓度成正比。在理想条件下，可检测到l0-20mol/L的荧光素酶。检测步骤：1．用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。2．设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。3．筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。4．扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。5．培养293（或其它目的细胞），并接种于24孔板中，生长10-24小时（80%汇合度）。6．将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。7．提取蛋白并用于荧光素酶检测。8．加入底物，测定荧光素酶的活性。9．计算相对荧光强度，并与空载对照比较。D-荧光素钾盐使用的注意事项。荧光素吸附指示剂

D-荧光素也常用于身体的外部研究。无锡D-荧光素钾盐生物公司

    后者能够易溶于水或缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成溶液后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。产品性质运输和保存运输条件：4℃冰袋运输；短期保存：4℃干燥避光长期保存：-20℃干燥避光母液保存：-20℃避光有效期长期保存：有效期一年工作液：先用现配使用方法1.体外生物发光检测1）用无菌蒸馏水溶解D-荧光素钾盐，配制成30mg/mL的储存液(100-200×)，混匀。立即使用，或分装于-20℃避光保存，避免反复冻融。2）用预热好的组织培养基将储存液稀释至mg/mL的工作液浓度。3）去除细胞培养基。4）待图像分析前，向细胞内添加荧光素工作液，37℃孵育5-10min，然后进行图像分析。2.***成像分析1）用无菌的DPBS(w/oMg2+、Ca2+)配制15mg/mL的荧光素的储存液，混匀。2）用µm滤膜过滤除菌。立即使用，或分装于-20℃避光保存，避免反复冻融。3）腹腔注射（.），按照150mg/kg的荧光素/体重浓度进行注射，以小鼠为例，每只小鼠体重假定20g，每只小鼠用量3mg；4）注射入体内10-15min（待光信号达到更强稳定平台期）后进行成像分析。注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定更高信号检测时间和信号平台期。 无锡D-荧光素钾盐生物公司

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