可以通过例如但不限于粘接固定的方式与透明玻璃承载板固定。一种可选的情况下，若干条微流通道2采用同心圆结构；以及若干条遮光条10采用同心圆结构。另一种可选的情况下，若干条微流通道2采用同心正多边形结构；以及若干条遮光条10采用同心正多边形结构。具体的，若干条遮光条10适于对若干条微流通道2进行间隔遮挡，即每相邻的三条微流通道2中位于中间的微流通道2被遮光条10遮挡。这样的情况下，使得遮光条10对于若干条微流通道2中其中部分的微流通道2进行光线的遮盖。这样做的意义是，当从透明盖板9背离透明玻璃支承板3的一侧进行紫外光照射一定时间时，以使若干条微流通道2中没有被遮光条10遮挡的微流通道2可以...

外泌体是指包含了复杂RNA和蛋白质的小膜泡(30-150nm)，现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。1983年，外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、尿液、脑脊液和乳汁中。有关他们分泌和摄取及其组成、“运载物”和相应功能的精确分子机制刚刚开始研究。外泌体被视为特异性分泌的膜泡，参与细胞间通讯，对外泌体的研究兴趣日...

其中在微流控芯片体内预制形成的若干条阵列分布的且彼此贯通的微流通道；所述微流通道分别与预制在所述微流控芯片体内的一进液通道和出液通道连通；所述进液通道远离微流通道的一端设为进液口，以及与所述出液通道远离所述微流通道的一端设为出液口；pdms形变膜，所述pdms形变膜与所述微流控芯片体背离所述透明玻璃支承板的顶端面相连；所述pdms形变膜适于向背离所述透明玻璃支承板一侧凸起变形；透明盖板，所述透明盖板上预制有若干条阵列分布的遮光条，所述透明盖板适于从所述透明玻璃承载板的一侧使若干条遮光条中部分的遮光条覆盖部分的微流通道以阻挡光线穿透。在本实用新型可选的实施例中，若干条所述微流通道采用同心...

且及时带走各种细胞代谢废物，减少细胞代谢废物对于细胞活性的影响。对于细胞培养本身来说，也需要更新培养基，以使得细胞实时处于比较好的生长环境，因此，利用循环更新的培养基来产生对于细胞的应力刺激，相比创造提供额外的应力刺激原动力来说，本实施例在节约成本上有明显的优势。（3）对于本实施例的细胞外泌体优化培养系统中，使用的是循环更新的培养基来对细胞产生应力刺激，相比现有技术中例如公告号为cn公开的基于微流控芯片的加压细胞培养系统和方法中采用的由压力的调控来产生对于细胞的应力刺激，虽然压力可以产生对于细胞的应力刺激，可以用于实验环境下细胞受到应力刺激下的各种性能的检测，但是对于细胞分泌外泌体来说...

南京翌科生物科技有限公司，是一家专注于外泌体与非编码RNA试剂研发、技术服务与临床转化的生物医药****。翌科生物基于团队十余年的研发基础，建立了行业前面的外泌体与非编码RNA研究和转化平台。公司目前拥有范围广丰富的产品线，包括外泌体提取与检测试剂、非编码RNA提取与检测试剂、转染试剂、microRNA表达文库、临床大数据库及涵盖分子、细胞、动物的综合科技服务等100多种试剂和科研外包服务。公司坚持国产试剂自主研发，目前已经拥有发明专利10余项，服务全国各级高校、研究所、医院、第三方检测机构、生物医药公司等数千家客户。翌科生物专做外泌体检测服务,医学实验,医学模型构建吗？怎么做外泌体服务 ...

考虑到便于对进液口5智能化地控制进液量，以及对于出液口6智能化地控制出液量，在进液管道11上且近进液口5设有一进液电磁控制阀13，以及在出液管道12上近出液口6设有一出液电磁控制阀15。此处具体来说，可在进液管道11与储存有培养基的储液罐21之间设置一进液控制泵17，以及在出液管道12与用于储存废液的收液罐23之间设置一出液控制泵18。采用实施例1的细胞外泌体优化培养系统对应的具体的细胞外泌体优化培养方法，包括：步骤s1：出液口6关闭，打开进液口5以通过进液口5从进液通道201通入含有细胞的凝胶；步骤s2：待凝胶充满微流通道2且使pdms形变膜8向背离透明玻璃支承板3一侧凸起变形至一定...

试剂盒组分：1、样本前处理（1）血清、血浆、细胞培养基等液体样本，开始实验前需经过5000g,离心10min（4℃）去除碎片，取上清；（2）外泌体样本提取后使用PBS溶解，溶解后5000g,离心10分钟（4℃）去除杂质，取上清。2、操作流程：（1）在1.5mLEP管中加入样本上清（血清、血浆、外泌体溶液等）20μL，加入20μLOneStep-A20ul和1μLOneStep-L；（2）涡旋混匀后，水浴锅50℃孵育20min，95℃孵育5min；（3）13000g,15min,4℃离心，取上清；（4）在荧光定量PCR板子的每孔中按下表加入各试剂：翌科生物代做实验,外泌体检测服务,实验样本检测。...

图6为本实用新型的细胞外泌体优化培养系统的微流控芯片体在另一种实施方式下的示意图；图7为本实用新型的细胞外泌体优化培养系统的pdms形变膜在未变形状态下的细胞的示意图；图8为本实用新型的细胞外泌体优化培养系统的pdms形变膜在变形状态下的细胞的示意图；图9为采用本实用新型的细胞外泌体优化培养系统进行细胞外泌体优化培养方法中pdms膜输注液体时鼓起的高度与细胞所受牵张力大小的关系图；图10至图21为以软骨细胞为例通过实验来检验经采用本实用新型的细胞外泌体优化培养系统进行细胞外泌体优化培养方法下的细胞分泌的外泌体的具体情况。图中：微流控芯片体1、微流通道2、进液通道201、出液通道202、...

外泌体具有由甘油二酸酯、磷脂、甘油磷脂、聚甘油磷脂和高含量的胆固醇和鞘脂组成的脂双层膜，与质膜相比，外泌体膜更具有刚性，使其在外环境中表现出稳定性。其中的一些脂质还具有结构外功能，包括在生物发生过程中的运输、识别和内化。除结构和运输成分外，外泌体还含有生物活性脂质，包括前列腺素、脂肪酸和可产生这些脂质的活性酶，可与靶细胞中的外周G蛋白偶联受体和核受体相互作用。当外泌体在1980年***被发现后，其被认为是细胞排泄废物的一种方式，如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与...

即3d配合应力刺激的培养组的产量大于单纯3d培养组的产量，而单纯3d培养组的产量大于2d培养组的产量。（5）请参阅图14所示的对不同环境下培养的细胞分泌的外泌体的质量的鉴定，本鉴定过程采用对于外泌体的蛋白组分进行，分别对应2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的细胞分泌的外泌体蛋白质组含量图，具体的：2d培养组（浅蓝色）和3d培养组（灰色）以及3d配合应力刺激的培养组（蓝色）中检测到的蛋白维恩图。数字表示每一组中检测到的蛋白数量，蛋白含量用ibaq法测定。图解：三种培养方式中，有380种蛋白存在交集，其外泌体都具有类似的蛋白组成。但是3d+应力刺激组的蛋白种类更多，...

且及时带走各种细胞代谢废物，减少细胞代谢废物对于细胞活性的影响。对于细胞培养本身来说，也需要更新培养基，以使得细胞实时处于比较好的生长环境，因此，利用循环更新的培养基来产生对于细胞的应力刺激，相比创造提供额外的应力刺激原动力来说，本实施例在节约成本上有明显的优势。（3）对于本实施例的细胞外泌体优化培养系统中，使用的是循环更新的培养基来对细胞产生应力刺激，相比现有技术中例如公告号为cn公开的基于微流控芯片的加压细胞培养系统和方法中采用的由压力的调控来产生对于细胞的应力刺激，虽然压力可以产生对于细胞的应力刺激，可以用于实验环境下细胞受到应力刺激下的各种性能的检测，但是对于细胞分泌外泌体来说...

7）请参阅图17所示的对不同环境下培养的细胞的活性鉴定，分别对空白组、2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的cck-8细胞增殖能力检测结果，在加入条件培养基3天后，各组明显大于对照组，在第四天时，3d配合应力刺激的培养组的细胞活性更强，与其他组比较时有统计学差异。（8）请参阅图18和图19所示的对不同环境下培养的细胞分泌的外泌体迁移性鉴定，分别对空白组、2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的细胞分泌的外泌体迁移实验结果，利用transwell小室测定软骨细胞的迁移能力。其中穿过基质的细胞被染色为紫色，细胞数量可直接反应其侵袭能力。其中3d配合...

以上的具体实施例，对本实用新型的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上只为本实用新型的具体实施例而已，并不用于限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。在本实用新型的描述中，需要理解的是，指示方位或位置关系的术语为基于附图所示的方位或位置关系，只是为了便于描述本实用新型和简化描述，而不是指示或暗示所指的设备或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本实用新型的限制。在本实用新型中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义...

也不利于流体中的细胞、蛋白和外泌体与通道中的抗体结合。因此，急需一种特异性分离外泌体的芯片，高通量、体积小和操作简单，为**早期及伴随诊断提供工具。技术实现要素：有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种外泌体分离微流控芯片；本发明的目的之二在于提供利用所述外泌体分离微流控芯片捕获外泌体的方法。为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：1、外泌体分离微流控芯片，所述芯片包括多个交错人字型微混合器，每个shm的人字形凹槽呈周期性地交错排列。推荐的，所述人字型微混合器每个循环周期由十个人字形的不对称连续区域组成。推荐的，所述交错人字型微混合器组成八个单独的人字形微通道，八个人字形微通道通过集管与...

外泌体膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作为配体与细胞膜上的受体结合，从而促进细胞内的信号通路。有报道称一些外泌体膜上蛋白在其来源细胞膜上未能检测出。三是外泌体膜可以与靶细胞膜直接融合，非选择性的释放其所含的蛋白质、mRNA以及microRNA。折叠编辑本段功能当外泌体在1980年初次被发现后，其被认为是细胞排泄废物的一种方式，如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、生病侵袭等方方面面。有研究表明生病来源的外泌体参与到...

且可由紫外光或可见光激发固化反应，形成适于细胞生长与分化且有一定强度的三维结构。其生物相容性远优于基质胶、纤维蛋白胶，而与胶原性能相近。对于本实施例采用的具有光敏基团的凝胶的制备采用如下方式：将10g水凝胶粉末溶解在100ml的dpbs中，置于50°孵箱中，在磁力搅拌下完全溶解后，逐滴加入8ml甲基丙烯酸酐，在孵箱中继续反应3h后，加入400mldpbs稀释，后于透析膜（分子截留量：12-14kda）中进行透析，置于40℃中反应一周，***搜集后冻干备用。步骤s4：打开出液口6，使得若干条微流通道2中未交联凝固的凝胶从出液口6排出；步骤s5：关闭出液口6，打开进液口5，对微流通道2内通...

从而明显提高细胞分泌的外泌体的产量和生物学质量。需要说明的是，对于进液口5和出液口6的开闭状态的控制具体可以通过对于与进液电磁控制阀13、进液控制泵17以及出液电磁控制阀15和出液控制泵18电性连接的控制器来智能化调控，具体为调整进液电磁控制阀13和出液电磁控制阀15的开闭时间，由两者开闭时间的调控来实现微流通道2内液体的流通量，以此来实现对于pdms形变膜8受到微流通道2内的液体的压力而产生的相对于微流控芯片体1凸起的高度的调整，使得pdms形变膜8向背离透明玻璃支承板3一侧凸起变形的高度h控制在一定的范围内，以使该范围对应的pdms形变膜8的变形产生的对于细胞的应力刺激使得细胞分泌...

以上的具体实施例，对本实用新型的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上只为本实用新型的具体实施例而已，并不用于限制本实用新型，凡在本实用新型的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本实用新型的保护范围之内。在本实用新型的描述中，需要理解的是，指示方位或位置关系的术语为基于附图所示的方位或位置关系，只是为了便于描述本实用新型和简化描述，而不是指示或暗示所指的设备或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本实用新型的限制。在本实用新型中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义...

10）请参阅图21所示的细胞在静力状态下和细胞受到牵张力状态下的电镜对比图，其中，左图为细胞在静力状态下的电镜图，右图为细胞受到牵张力状态下的电镜图。具体的，细胞受到了牵张力的作用而发生变形，变形幅度为30%。综上，通过本实施例的细胞外泌体优化培养方法培养的细胞不仅可以提高细胞的外泌体分泌量，而且分泌的外泌体的生物学质量更强。相比现有技术中的例如对于细胞进行的气压应力刺激的培养方法，本实施例的细胞外泌体优化培养方法拥有以下几点优势：（1）本实施例的细胞外泌体优化培养方法无需额外的应力刺激系统，只靠细胞培养生长的过程必需的培养基的循环供给即可产生循环的应力刺激，即对于本实施例中的培养基既...

平滑通道)***增加到×1010±×109particles/ml(人字形凹槽通道)(p<，图5，b)。根据标准的外泌体分离方法测试了hbexo-chip捕捉胰腺*血浆外泌体的能力。将我们收集到的egfp标记的外泌体掺入健康体检者的血浆中，并分为一式两份，一份用于超速离心提取其中的外泌体，另一份用于微流控芯片提取外泌体。提取外泌体中rna并用qpcr检测**外泌体特异信息egfp，pcr结果表明两种方法得到的egfp拷贝数有明显差异，hbexo-chip捕捉特异性外泌体的能力大约是超速离心的4倍(图5，c)。实施例4、为验证分泌到血液中的**来源的外泌体可能会提供更容易获得和更具代表性...

主波矢量q＝2π/100μm(如图2)，shm的长为2500μm，人字形微通道的间隔为300μm，形成通道区域为长为39000μm，宽为22115μm。与传统的平壁微流控芯片相比，人字形结构能诱导各向异性流形成，***产生微涡流破坏血浆中外泌体行进的层流流线，导致它们发生“移位”，以此增加抗体涂层通道中外泌体与抗体相互作用的机会(图3)。实施例2、洗脱液验证将血浆用实施例1设计的微流控芯片进行洗脱，外泌体捕获原理如图4中a所示。洗脱液为ph为～(图4中b)，结果发现低ph的甘氨酸-hcl缓冲液比在80μl/min的流速下能释放出更多的外泌体(30-150nm)，而两个对照组(pbs缓冲...

外泌体试剂盒提取：l转移样本至新管，加入与血清/血浆等体积的试剂；l涡旋混匀，此步后溶液将变混浊。l放入4℃冰箱静置过夜；l4℃，3220g离心60min，弃上清，外泌体沉淀存留在离心管底部；l用适量PBS重悬外泌体沉淀，存放于4℃（不超过1周）或-20℃/-80℃（长时间保存）外泌体膜染料：PKH67、PKH26：PKH67（绿色荧光）或PKH26（红色荧光）外泌体染色试剂盒，采用专门使用外泌体膜标记技术可以稳定的与外泌体膜结构结合并发出绿色/红色荧光，细胞毒性较小，荧光背景低，脂溶性高。主要用于外泌体的体外和体内（invivo）示踪，也可用于细胞膜染色。翌科生物做外泌体提取吗？北京哪家做外...

外泌体的分离对于理解它们的作用机制和它们在生物医学科学中的应用是至关重要的。一些实验室已经成功地利用诸如超离心法、超滤法、层析法、基于聚合物的沉淀法和抗体偶联磁珠的亲和捕获等技术分离外泌体。已有研究表明，密度梯度离心法可以分离出比较纯净的外泌体。1983年外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现，但人们一直认为它只是一种细胞的废弃物。然而比较近几年，人们发现这种微小膜泡中含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，能作为信号分子传递给其他细胞从而改变其他细胞的功能。这些发现点燃了人们对细胞分泌膜泡的兴趣。比较近的研究发现外泌体在很多生理病理上起着重要的作用。翌科生物的外泌体检测服务,医学实验,医学模型构建做的怎...

外泌体具有由甘油二酸酯、磷脂、甘油磷脂、聚甘油磷脂和高含量的胆固醇和鞘脂组成的脂双层膜，与质膜相比，外泌体膜更具有刚性，使其在外环境中表现出稳定性。其中的一些脂质还具有结构外功能，包括在生物发生过程中的运输、识别和内化。除结构和运输成分外，外泌体还含有生物活性脂质，包括前列腺素、脂肪酸和可产生这些脂质的活性酶，可与靶细胞中的外周G蛋白偶联受体和核受体相互作用。当外泌体在1980年***被发现后，其被认为是细胞排泄废物的一种方式，如今随着大量对其生物来源、其物质构成及运输、细胞间信号的传导以及在体液中的分布的研究发现外泌体具有多种多样的功能。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与...

图6为本实用新型的细胞外泌体优化培养系统的微流控芯片体在另一种实施方式下的示意图；图7为本实用新型的细胞外泌体优化培养系统的pdms形变膜在未变形状态下的细胞的示意图；图8为本实用新型的细胞外泌体优化培养系统的pdms形变膜在变形状态下的细胞的示意图；图9为采用本实用新型的细胞外泌体优化培养系统进行细胞外泌体优化培养方法中pdms膜输注液体时鼓起的高度与细胞所受牵张力大小的关系图；图10至图21为以软骨细胞为例通过实验来检验经采用本实用新型的细胞外泌体优化培养系统进行细胞外泌体优化培养方法下的细胞分泌的外泌体的具体情况。图中：微流控芯片体1、微流通道2、进液通道201、出液通道202、...

LDH,亲环素A,FASN,MDH1和CNP）、核糖体蛋白（RPS3）、信号转导因子（黑色素瘤分化相关因子,ARF1,CDC42,人类红细胞膜整合蛋白,SLC9A3R1）、粘附因子（MFGE8、整合素）、细胞骨架蛋白以及泛素等。外泌体的提取主要包括以下几种方式。一是超速离心法，这是外泌体提取更常用的方法。此种方法得到的外泌体量多，但是纯度不足，电镜鉴定时发现外泌体聚集成块，由于微泡和外泌体没有非常统一的鉴定标准，也有一些研究认为此种方法得到的是微泡不是外泌体。二是过滤离心，这种操作简单、省时，不影响外泌体的生物活性，但同样存在纯度不足的问题。三是密度梯度离心法，用此种方法分离到的外泌体...

1983年，外泌体初次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome（外泌体）”。现今的外泌体特指的是：直径在40-100nm{纳米}的盘状囊泡，其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。所有培养的细胞类型均可分泌外泌体，且外泌体天然存在于体液中，包括血液、唾液、脑脊液和乳汁中。外泌体的功能取决于其所来源的细胞类型，其可参与到机体免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、**侵袭等方方面面。翻译成人话就是：外泌体人体本身是有的！是安全的！它的本质作用是承载与传递作用。它具有不同的功效的原因主要是看它从...

外泌体的生成，微泡是由质膜的出芽形成的，膜双层通过磷脂的不对称分布来维持脂质的“多面性”。外层富含磷脂酰胆碱和鞘磷脂，而内层主要由磷脂酰丝氨酸和磷脂酰乙醇胺形成。然而，胞质Ca2+的内流可以破坏这种不对称性，导致磷脂跨膜双层的重新分配，促进膜起泡。依赖Ca2+的蛋白水解同时降解膜相关的细胞骨架，促进出芽过程。在外泌体形成过程中，首先，MVE(多囊体)向内芽形成小泡，内含来自细胞质的货物(蛋白质、mRNA和miRNAs)。然后，MVE要么与细胞膜融合释放外泌体(内囊泡)，要么与溶酶体融合降解MVE含量。到达目的地后，外泌体通过内吞途径或与靶细胞膜融合，将其内容物释放到细胞质中。细胞的膜的囊泡也可...

均符合国际标准，而且呈相对的正态分布，检测结果可信度高。2d培养组的外泌体直径略大于其他组。（2）请参阅图11所示的对外泌体的鉴定，分别通过wb鉴定对应2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的细胞分泌的外泌体特征蛋白，具体的，westernblotting结果验证了外泌体内特异性标志蛋白的表达，可见此外泌体内明显表达cd9、cd63、tsg101蛋白。3d培养的外泌体组灰度值高于2d培养组，说明外泌体的蛋白富集度更高。（3）请参阅图12所示的对外泌体的鉴定，tem电镜下对应2d培养组、3d培养组和本实施例的3d配合应力刺激的培养组的细胞分泌的外泌体的结构，具体的：透...

翌科生物团队专注于外泌体研究，公司拥有成熟的外泌体研发经验和技术服务平台，具备全套的外泌体提取、鉴定、分析试剂与服务。外泌体（exosome）是一群由细胞分泌的直径在40-150 nm左右、密度范围为1.09-1.18 g/ml的具有双层磷脂膜结构的囊泡样物质，包含蛋白质、mRNA、miRNA及其它信号分子（图1）。目前的研究发现，各个细胞类型（如肿瘤细胞、神经元细胞、间充质干细胞、成纤维细胞、内皮细胞、巨核细胞等）均有分泌外泌体的能力，并且外泌体也被发现存在于人体的各种体液（如血液、唾液、尿液、乳汁等）。体液中的外泌体及其内含物被认为可作为包括zhong瘤在内的多种疾病的生物标志物，广泛应用...