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    具体实验流程：注：该操作流程通常用来检测转染了萤火虫荧光素酶基因的真核细胞中荧光素酶表达的活性，不适用于对细菌荧光素酶进行检测。1．实验***天，消化并接种细胞（根据具体实验选择合适的细胞）于35mm细胞培养皿，置于5％CO2、饱和湿度的37℃培养箱内培养过夜。2．等细胞密度达到70％时用Luciferase报告基因质粒、LacZ的表达质粒及其它质粒（根据具体实验确定）共转染细胞（根据具体实验选择转染方法，如磷酸钙沉淀法、PEI、lipofectamine2000等均可）。3．转染24－36h后，吸取培养液，用预冷的PBS（无钙和镁离子）洗涤细胞。注：荧光酶的酶促反应会被痕量的钙所抑制，故用磷酸钙转染的细胞在收集细胞前应充分洗涤除去含钙介质。4．在每个培养皿中加入350μl预冷的harvestbuffer,于4℃或冰上放置10min裂解细胞。5．在细胞裂解期间，准备足量的ml微量离心管，将ATPbuffer与luciferinbuffer以1：，每管100μl。6．依次取等体积的细胞裂解液（100μl）至步骤5中的离心管中，迅速混匀，在发光仪（Luminometer）上读取吸光值。注：发光反应会迅速衰减，将细胞裂解液加入反应液后5s内必须读取吸光值。7．确保以相同操作手法读取全部样品吸光值后。D-荧光素钾盐合作需要交押金吗？泰州D-荧光素钾盐供应商

    可运用荧光素酶报告系统分析其相对活性。c.验证特定转录因子同其调控序列的作用，将该序列（通常为启动子区域）插入报告基因载体，同时在实验细胞***转过表达该转录因子，可分析转录因子过表达是否提高荧光素酶活性。d.可以分析信号通路是否***，将该信号通路的下游响应原件序列构建入报告基因载体，在不同上游信号条件下，荧光素酶活性**了通路的下游响应。例如在GPCR研究中，将cAMPresponseelement（CRE）载入报告基因载体，构建稳定表达细胞株后，可以用于分析GPRC的***与6b7a976f-99ae-4c48-8159-4bd筛选。又如，将HIF1α的响应原件hypoxia-responsiveelement(HRE)插入luciferase报告载体构建稳转细胞株，可以用于低氧相关通路的研究。e.验证microRNA的靶序列，将待测的3’UTR序列插入报告基因载体，再共转入该microRNA，如果荧光素酶活性下降，则提示为其靶序列。Q：在[信诺金达]做荧光素酶报告基因检测，需要提供什么？实验结果包括哪些？您需要提供：1.基因序列或模板，需提供详细的转录因子、目的基因或microRNA信息；2.实验细胞，[信诺金达]默认为使用293T细胞，实验结束后，[信诺金达]会为您提供实验流程及完整报告一份，包括实验原始数据、图片、分析结果等。泰州D-荧光素钾盐供应商做D-荧光素钾盐测试价格是多少。

    萤火虫荧光素酶（Luciferase）是一种常用的信号分子，可以用来标记肿瘤细胞.一．细胞方法将带有荧光素luc转酶报告基因的真核表达重组质粒pRc/CMV2-7，利用G418筛选，获得稳染人乳腺哎细胞株MCF-7-luc，并在稳定表达荧光素酶基因的细胞克隆MCF-7体外评价其发光能力。通过建立裸鼠移植瘤模型，利用活题生物发光成像系统检测肿大的瘤生长及转移情况，为下一步监测裸鼠移植瘤对药物作用的变化情从而为分析药物对肿大的瘤的治的好效果提供理想的状况.G418筛选浓度的确定：37℃细胞培养箱中常培养,G418按0、200、400、600、800、1000μg/ml设置6个浓度梯度。在细胞接种24h后，加入6孔板中，每个浓度设2个孔在10～14d内全部死亡。每天观察细胞生长情况，死亡更低的G418浓度，即为筛选质粒转染克隆MCF－7细胞的浓度。1)细胞转染取对数生长期的MCF－7细胞，将细胞接种于6孔板内待细胞融合度达到80%～90%孔培养板中，TM即可转染。按照Lipofectamine2000试剂盒操作指南进行转染。在250μl无血清、无双抗的DMEM培培养基中加入luc质粒8μg/ml的pRc/CMV2-在250μl无血清、无双抗的DMEM培养基中加入10μlLipofectamineTM2000，室温培育5min。将上述2种稀释液混匀。

    随后30年里，Promega不断在萤光素酶实验工具领域推陈出新，保持技术带跑的人的地位。这里提到的萤光素酶即荧光素酶。1991萤光素酶检测系统（LAR）Promega公司推出的7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3萤光素酶检测试剂LuciferaseAssaySystem（LAR），为灵敏、非放射性的报告基因检测拉开了序幕。LAR与萤火虫萤光素酶（luc）报告基因一起，为研究人员开始了解基因表达调控因子提供了首要的工具。1995Dual-Luciferase®报告基因检测系统（DLR）DLR是7b0a8f9c-3a4b-41a1-a7f8-3允许在单个样本中依次检测两个报告基因的试剂。通过允许萤光素酶活性的内部归一化，在提高报告基因检测的可靠性方面取得了关键进展。此外，pGL3报告基因载体系列具有改良后的萤火虫萤光素酶基因，luc+。这个改造一种报告基因以实现性能改进的例子后来被进一步应用到pGL4和luc2报告基因上，通过生物信息学和合成方法，实现了更大的改进。[1]1999ENLITEN®/UltraGlo™重组萤光素酶Promega公司在早期推出的一种重组萤火虫萤光素酶（Enliten）基础上，改造出了一种称为UltraGlo™的热稳定性萤光素酶。UltraGlo™的开发是在各种检测和储藏条件下进行一步法“加样-读数”检测的关键。此后。D-荧光素钾盐测试怎么样？

    因此只有在活细胞内才会产生长发生光现象，并且发光光强度与标记细胞的数目线性相关。结构与性能荧光素在氧气、ATP存在的条件下和荧光素酶发生反应，生成氧化荧光素(oxyluciferin)，并产生长发生光现象。荧光素是腹腔注射或尾部静脉注射进入小鼠体内的，约一分钟就可以扩散到小鼠全身。荧光素的半衰期约三个小时，只有活细胞才能够持续表达荧光素酶。(1)荧光素不会影响动物的正常生理功能。(2)荧光素是280道尔顿的小分子，水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透细胞膜和血脑屏障。(3)荧光素在体内扩散速度快，可通过腹腔注射或尾部静脉注射进入动物体内。腹腔注射扩散较慢，持续发光长。荧光素腹腔注射老鼠后约1min后表达荧光素酶的细胞开始发光，10min后强度达到稳定的更高点，在更高点持续约20~30min后开始衰减，约3h后荧光素排除，发光全部消失，更佳检测时间是在注射后15~35min之间；若进行荧光素静脉注射，扩散快，但发光持续时间很短。科研人员根据大量的实验总结出荧光素的合适的用量是150mg/kg，即体重20克的小鼠需要3毫克的荧光素。(4)观察时间的间隔没有更短限制，只要观察的条件控制一致就可以。虽然底物在动物体内有一定的代谢过程。南京翌科生物科技有限公司的D-荧光素钾盐测试怎么样？泰州D-荧光素钾盐供应商

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    可用于需要低检测限的测定具有用于研究基因调控和功能的快速，简单且均一的生物发光测定法与标准细胞生长培养基的使用兼容高斯荧光素酶近年来，其他荧光素酶（例如高斯荧光素酶）的使用有所增加，因为这些报告基因较小，并且不需要ATP的存在。高斯荧光素酶是一种20kD的蛋白质，可通过氧气催化腔肠素氧化，产生光。来自于海洋足类高斯氏菌的生物发光酶在表达后可有效地从哺乳动物细胞中分泌出来。Amplite™高斯荧光素酶报告基因检测试剂盒使用专有的发光配方来定量细胞培养基中的荧光素酶活性。当该试剂与高斯荧光素酶相互作用时，产***光产物，该发光产物提供强发光。Amplite高斯荧光素酶报告基因测定试剂盒特点：提供了与HTS液体处理仪器兼容的所有基本组件它们具有高灵敏度，可以以方便的96孔和384孔微量滴定板形式进行半衰期为一小时的“辉光型”信号在大量检测板之间提供一致的信号与标准细胞生长培养基兼容海肾荧光素酶海肾萤光素酶是一种从海桑（Renillareniformis）分离的36kDa蛋白。与萤火虫荧光素酶相比，海肾荧光素酶的底物和辅因子要求不同。海肾荧光素酶在氧气存在下使用腔肠素，产生480nm的蓝光。与萤火虫萤光素酶类似。泰州D-荧光素钾盐供应商

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