CCK-8的原理
所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢,因为这里没有考虑到细胞代谢水平的高低,有些细胞在***处理后,可能活细胞数不变,但是代谢率低了以后,细胞呼吸减弱,NAD+产生减少,测出的Formazan也会减少,所以此时怎么算呢(此时我就比较怀恋中性红了)?当然也有解决的办法,下期给大家介绍。因此可利用这个原理进行细胞增殖和毒性分析,在吸光度为450时检测读数。颜色也会越深 cck8试剂盒原理是什么a?北京mts和cck8的区别
CCK8,即Cell Counting Kit-8,与MTT法的主要区别如下:一、原理不同1、Cell Counting Kit-8:CCK-8 试剂盒利用了日本同仁化学研究所(Dojindo)开发的四唑盐WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)。2、MTT法:其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。北京mts和cck8的区别所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。
五、实验注意事项:·若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。·如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK8之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉***影响。当然***影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入***后的空白吸收即可。·当使用标准96孔板时,贴壁细胞的**小接种量至少为1,000个/孔(100μl培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500个/孔(100μl培养基)。
CCK-8的原理
所以粗略的可以认为生成的甲瓒物的颜色的深浅与活细胞的数量成正比。为什么是粗略的呢,因为这里没有考虑到细胞代谢水平的高低,有些细胞在***处理后,可能活细胞数不变,但是代谢率低了以后,细胞呼吸减弱,NAD+产生减少,测出的Formazan也会减少,所以此时怎么算呢(此时我就比较怀恋中性红了)?当然也有解决的办法,下期给大家介绍。因此可利用这个原理进行细胞增殖和毒性分析,在吸光度为450时检测读数。用途及常用的公 CCK8检测细胞增殖和毒性实验.
细胞增殖实验就是对细胞生长的测定,常用的方法有MTT、CCK8以及流式检测。阅读大量文献发现,如果想证明一个***或者说是一个作用条件对细胞生长的影响,基本上大家都采用MTT或CCK8结合流式的双标准来证明作用效果。所以,***先给大家介绍一下MTT和CCK8比色法的实验操作和注意事项。MTT实验操作1、在96孔板中培养细胞,设置对照组(细胞+无血清培养基)、实验组和空白组(无血清培养基),可以采用如下图的排版方式:2、在对照组和实验组中,每孔加入细胞悬液100ul,培养24小时细胞增殖测定:细胞增殖实验在很多领域都会用到,比如**相关、损伤后修复等。北京mts和cck8的区别
那它的用途也就大致可以猜到,和细胞增殖、细胞毒性相关的实验都可以。北京mts和cck8的区别
制作标准曲线1.先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。2.按比例(例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每组3-6个复孔。3.接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK-8试剂培养一定时间后测定O.D值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),O.D值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8后的培养时间)。北京mts和cck8的区别