酵母双杂交(Y2H):植物转录因子(Plant transcripter factors, TFs)是调控植物生长发育和环境适应性的关键分子。虽然在一些数据库中,如RiceSRTFDB (Priya and Jain, 2013), Ricettissuetfdb (Chen et al.,PlnTFDB (Pérez-Rodríguez et al., 2009)和PlantTFDB (Jin et al., 2017),可以预测水稻转录因子功能。但通过具体实验研究,来直接证实转录因子对植物的调控作用仍然是必不可少的。酵母双杂交(Y2H)和酵母单杂交(Y1H)是被用于研究蛋白-蛋白以及蛋白-DNA互作的**常用技术。为了方便和促进水稻育种研究,陈凡老师与欧易生物达成合作,整合双方优势资源,历经春秋与冬夏,成功构建了基于粳稻(日本晴)基因组的水稻转录因子文库。该项成果以“一种高效的筛选系统来鉴定大米转录因子的蛋白质-蛋白质或蛋白质-DNA相互作用伙伴”为题,发表于杂志JGG上。欧易生物是国内较早提供酵母杂交技术服务的生物公司,较早掌握Gateway和Smart两种建库方法。陕西酵母文库质量
通过酵母双杂交文库进行了互作蛋白的筛选,结果显示TaTIFY9可以与TaSRL1相互作用(下图A),并通过Bi-FC、荧光互补实验得以证实(图B-C)。TaTIFY9属于茉莉酸信号途径关键因子JAZ家族的成员之一。RT-PCR显示TaTIFY9也主要表达于小麦根部,外源施加茉莉酸可以***诱导TaTIFY9表达。这一结果表明,TaSRL1可能通过与TIFY9结合介导了茉莉酸对根生长的抑制。已有研究表明 ERF 蛋白可以特异性结合到靶基因启动子序列中的 GCC-box 序列。TaSRL1 属于 ERF 家族。在生长素转运基因 TaPIN2 的启动子序列中含有一个 GCC-box 序列。酵母单杂交实验显示,TaSRL1 可以直接与 TaPIN2 启动子结合并***其表达(图 A),但该***作用会被TaSRL1的互作蛋白TaTIFY9 所抑制(图 B和C)。北京宣传酵母文库做什么酵母文库双杂交技术及应用。
蛋白被泛素化后(即蛋白上结合了泛素),意味着将要被运往蛋白酶体降解,一般用于降解细胞内老弱病残蛋白,再回收利用。同时也被用于排除异己,抵御外敌。该过程需要一系列酶介导:泛素***酶(E1)、泛素偶联酶(E2)和泛素E3连接酶(E3)。其中E3是起特异性识别作用的,即决定谁该被降解,不能把好同志降解掉。所以E3基因很多,植物中主要有四种类型:HECT、RING、U-box和CRLs。其中CRLs是植物中含量**丰富的E3连接酶。本研究中,通过酵母双杂交筛选到的标题蛋白MdBT2,整好是CRLs亚家族之一。因此作者推测MdBT2可能在与ApNMV1a结合后,起到了促进其泛素化和降解的作用。
酵母双杂交还可以这么用?Y2H-seq 揭示不老松年龄。***小欧又给大家带来了一篇酵母双杂交结合高通量测序技术的应用文章。北京林业大学钮世辉老师团队,在传统的酵母双杂交技术流程基础上,巧妙的结合了NGS技术,优化建立了Y2H-seq技术,**缩短了常规的筛库后测序验证周期,节约了实验成本。文章中应用Y2H-seq技术,对不老松年龄密码进行了有趣的研究,其中所用酵母双杂交文库由欧易生物协助完成。众所周知,酵母双杂交技术是研究蛋白相互作用的利器。目前已知的蛋白质相互作用至少有一半是通过酵母双杂交技术发现的。但是做过酵母杂交实验的小伙伴也都知道蛋白筛选较容易,但是筛选后,想知道获得的阳性克隆都对应的是啥基因,所花费的人力物力相当不小。有困难解决困难,勇敢牛牛不怕困难。Gateway方法酵母双杂交文库构建核系统与膜系。
酵母双杂交文库:本研究通过蓝/红光诱导青蒿中青蒿素生物合成基因的表达,使用转录组分析确定了一个WRKY转录因子AaWRKY9,可明显***青蒿素生物合成相关基因的表达。实验表明AaWRKY9通过光依赖JA信号通路调节,在青蒿素生物合成中发挥重要作用,AaWRKY9通过与AaDBR2和AaGSW1的启动子结合正向调节青蒿素的积累。此外,JA信号通路中的抑制因子AaJAZ9与AaWRKY9相互作用,并抑制其转录***活性,而在MeJA存在情况下,AaJAZ9被降解,AaWRKY9的转录***活性增加,进而促进青蒿素生物合成基因的表达。酵母双杂交文库结果表明,AaWRKY9有助于光和JA信号调节青蒿素的生物合成,为两种信号途径在植物次生代谢物合成中的整合调控提供了新见解。酵母结构及功能介绍酵母的应用 。山西品质酵母文库做什么
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单杂交筛选为了挖掘影响ALA诱导苹果黄酮醇积累的关键性调控因子,作者以Y1HGold[proMdFLS1-AbAi] 为诱饵,通过酵母单杂交筛选了ALA处理后的苹果愈伤组织cDNA文库。结果显示筛选出的蛋白质主要参与光合作用调控、碳糖代谢、氧化/渗透胁迫响应、***信号转导、木质素生物合成、果实成熟发育等过程,以及一些功能未知的蛋白质。其中, MdSCL8转录因子,由于其在草莓中的同源基因已被报导与黄酮的合成有关,引起了研究者的注意。进一步通过Y1H assay验证确认了MdSCL8可以与MdFLS1启动子互作(图2A)。通过双荧光素酶实验和GUS检测,发现MdSCL8可以负向调控MdFLS1启动子活性(图2B-D)。陕西酵母文库质量
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