利用酵母双杂交技术进行筛选,结果显示SP8可以与水稻OsMYC3蛋白相互作用,并且二者互作关系通过酵母一对一互作、BiFC、Co-IP、LCI实验得以验证(图A-C)。利用截短的SP8进行酵母一对一互作和Co-IP检测表明,与OsMYC3的结合依赖于SP8的NTP结构域(图D-E);同样,OsMYC3的TAD结构域也是二者互作所必不可少的(图F)。酵母双杂交、BiFC实验表明,OsMYC3可以与OsJAZ相互作用。经茉莉酸处理,野生对照株根的长度明显被抑制、一系列JA生物合成和信号传导相关基因表达量上升,但Osmyc3突变体中抑制程度减轻、JA相关基因表达量上升减少。酵母单杂筛库酵母文库筛选酵母双杂交筛库步骤。贵州品质酵母文库报价
进行了酵母双杂交文库的筛选,结果显示钙依赖的种子特异性蛋白激酶SPK可以与OsNF-YB9相互作用,分段截取互作验证显示OsNF-YB9的N端是互作所必须的(图a-b),并通过双荧光分子互补实验、BiFC、体外GST-pulldown实验得以证实(图c-e)。亚细胞定位显示SPK主要在细胞质中表达,OsNF-YB9在细胞质和细胞核中都有表达,共表达SPK和OsNF-YB9***促进了OsNF-YB9的入核(图f),表明SPK和OsNF-YB9的相互作用可能促进了OsNF-YB9从细胞质向细胞核的运输。RT-PCR显示SPK在发育中的种子中高表达,在5DAF开始***,并在10-30DAF维持高表达水平(图a-b)。spk敲除突变体种子中垩白率的增加(图c-e),但粒形和粒重与野生型没有***差别。云南品质酵母文库做什么酵母文库双杂交技术及应用。
小欧从2018年即开始关注酵母杂交与高通量测序相结合的技术发展,如2017年CaoGang老师等发表的RLL-Y2H技术,实现了文库筛文库可能,该技术通过对酵母双杂常用载体的改造,并结合高通量测序,可直接获得AD-BD互作蛋白对。所用方法相当巧妙,感兴趣的同学请点击《当酵母双杂交遇到高通量测序》。钮老师团队之前的研究已经鉴定了DAL1作为一种保守的针叶树年龄生物标记基因,在油松从营养生长到生殖生长的时相转变过程中起重要作用。为了进一步理解年龄效应如何驱动针叶树的发育,阐明与DAL1相关的蛋白互作网络很关键。钮老师团队利用传统的Y2H筛选技术结合NGS测序技术,优化得到了Y2H-seq技术,与传统的筛选测序相比,大幅度节省了时间和实验成本。
文章中酵母双杂交文库由欧易生物制备。2021年5月,北京林业大学钮世辉副教授为通讯作者,在PlantPhysiology杂志(IF:6.902)在线发表了题为“MADS-boxtranscriptionfactorsMADS11andDAL1interacttomediatethevegetative-to-reproductivetransitioninpine”的研究论文,深入探讨了油松中营养生长-生殖生长时相转变调控的分子机制。北京林业大学马晶晶博士为***作者,文章中酵母双杂交文库由欧易生物制备。本研究通过 7 个树龄的油松样品转录组测序,鉴定到一个与年龄信号***相关的基因模块,该模块包含 33 个转录因子,包括 SOC1-like、DAL1 等。酵母文库筛选做文库筛选前,首先需要检测你的诱饵的自***活性和对酵母的毒性。
酵母双杂交还可以这么用?Y2H-seq 揭示不老松年龄。***小欧又给大家带来了一篇酵母双杂交结合高通量测序技术的应用文章。北京林业大学钮世辉老师团队,在传统的酵母双杂交技术流程基础上,巧妙的结合了NGS技术,优化建立了Y2H-seq技术,**缩短了常规的筛库后测序验证周期,节约了实验成本。文章中应用Y2H-seq技术,对不老松年龄密码进行了有趣的研究,其中所用酵母双杂交文库由欧易生物协助完成。众所周知,酵母双杂交技术是研究蛋白相互作用的利器。目前已知的蛋白质相互作用至少有一半是通过酵母双杂交技术发现的。但是做过酵母杂交实验的小伙伴也都知道蛋白筛选较容易,但是筛选后,想知道获得的阳性克隆都对应的是啥基因,所花费的人力物力相当不小。有困难解决困难,勇敢牛牛不怕困难。文库筛选经验 与上千所高校及科研院所合作 完成年均400多个物种的文库构建及筛选 。四川技术酵母文库报价
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蛋白被泛素化后(即蛋白上结合了泛素),意味着将要被运往蛋白酶体降解,一般用于降解细胞内老弱病残蛋白,再回收利用。同时也被用于排除异己,抵御外敌。该过程需要一系列酶介导:泛素***酶(E1)、泛素偶联酶(E2)和泛素E3连接酶(E3)。其中E3是起特异性识别作用的,即决定谁该被降解,不能把好同志降解掉。所以E3基因很多,植物中主要有四种类型:HECT、RING、U-box和CRLs。其中CRLs是植物中含量**丰富的E3连接酶。本研究中,通过酵母双杂交筛选到的标题蛋白MdBT2,整好是CRLs亚家族之一。因此作者推测MdBT2可能在与ApNMV1a结合后,起到了促进其泛素化和降解的作用。贵州品质酵母文库报价
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