苹果酵母文库:黄酮醇是一类重要的次生代谢产物,在防治人类**、*******、****血脂、抗氧化、抗病毒、抗过敏等方面发挥着重要作用。苹果除了含有多种维生素之外,还富含黄酮醇,这是"一日一苹果,医生远离我"的重要原因。了解黄酮醇的生物合成调控对改善苹果果实品质、提高苹果营养价值和提高苹果环境适应性具有重要意义。2022年2月,南京农业大学汪良驹团队在国际期刊分子科学上发表了题为“MdSCL8asaNegativeRegulatorParticipatesinALA-InducedFLS1toPromoteFlavonolAccumulationinApples”的研究论文,该研究发现MdSCL8作为MdFLS1的新调节因子,在ALA诱导苹果黄酮醇积累的过程中发挥负调控作用。该项目中所用的苹果酵母文库由欧易生物构建。酵母单杂交/双杂交文库构建简述酵母双杂交。上海酵母文库规格
酵母双杂交文库:本研究通过7个树龄的油松样品转录组测序,鉴定到一个与年龄信号***相关的基因模块,该模块包含33个转录因子,包括SOC1-like、DAL1等。油松和晚坐果白皮松突变体中的基因表达模式分析显示,PtMADS11与生殖能力之间存在紧密相关性。酵母双杂交显示,MADS11和DAL1直接相关作用以参与对年龄信号的调控。过表达PtMADS11、PDAL1可以部分挽救拟南芥中miR156过表达或spl突变导致的开花延迟缺陷。只有PtMADS11可以挽救ft突变体中的开花缺陷,表明它与PtDAL1在拟南芥开花调控网络中发挥了不同的作用。浙江发展酵母文库酵母三杂交系统原理酵母双杂交文库构建。
通过酵母双杂交进行筛选,结果显示 SWC6 可以在蓝光下与 CRY1 相互作用(图 A-C)。同样,酵母双杂交实验显示 CRY2 也可以在蓝光下与 SWC6 相互作用(图 D)。并通过 pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 实验(图 E-L)证实 CRY1、CRY2 与 SWC6 的结合是蓝光依赖性的。SWC6 是真核生物中已报道的 SWR1 复合物亚基,负责催化 H2A.Z 在染色质上的替换。已报道 SWR1 复合物中 SWC6 可以与 ARP6 亚基结合。Pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 实验(图 A-H)显示,CRY1、CRY2 可以蓝光依赖性与 ARP6 结合。
酵母双杂交实验表明,PtMADS11 与 PtDAL1 之间存在直接的相互作用(图 C),并通过 BiFC、GST pull-down 得以证实(图 D-E)。为进一步研究在年龄信号调控中的作用机制,分别构建了过表达PtDAL1和PtMADS11的拟南芥。与对照相比,过表达PtDAL1***提前了拟南芥的营养-生殖时相转换(图A),证实PtDAL1在生殖起始和控制花***建立起到了关键作用。过表达PtMADS11植株在短日照下表现出早开花和花序结构过早终止,表明PtMADS11在开花调节和花序内分生组织命运起到调控作用。在拟南芥中利用年龄调控通路不同节点关键基因突变体进行功能互补实验,结果显示过表达PtDAL1可以恢复由于过表达miR156导致的开花延迟,但ft缺失会导致PtDAL1失活,PtDAL1过表达也不能恢复soc1-1-2突变体的表型,表明PtDAL1依赖或处于FT/SOC1的上游。而过表达PtMADS11可以恢复由过表达miR156或ft缺失导致的开花延迟,表明PtMADS11对开花的调控不依赖于miR156或FT。推出两套酵母双杂交文库构建体系MART体系。
蛋白被泛素化后(即蛋白上结合了泛素),意味着将要被运往蛋白酶体降解,一般用于降解细胞内老弱病残蛋白,再回收利用。同时也被用于排除异己,抵御外敌。该过程需要一系列酶介导:泛素***酶(E1)、泛素偶联酶(E2)和泛素E3连接酶(E3)。其中E3是起特异性识别作用的,即决定谁该被降解,不能把好同志降解掉。所以E3基因很多,植物中主要有四种类型:HECT、RING、U-box和CRLs。其中CRLs是植物中含量**丰富的E3连接酶。本研究中,通过酵母双杂交筛选到的标题蛋白MdBT2,整好是CRLs亚家族之一。因此作者推测MdBT2可能在与ApNMV1a结合后,起到了促进其泛素化和降解的作用。欧易生物酵母文库项目发表 Science 封面文章欧易生物。陕西品质酵母文库
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酵母双杂交(Y2H):植物转录因子(Plant transcripter factors, TFs)是调控植物生长发育和环境适应性的关键分子。虽然在一些数据库中,如RiceSRTFDB (Priya and Jain, 2013), Ricettissuetfdb (Chen et al.,PlnTFDB (Pérez-Rodríguez et al., 2009)和PlantTFDB (Jin et al., 2017),可以预测水稻转录因子功能。但通过具体实验研究,来直接证实转录因子对植物的调控作用仍然是必不可少的。酵母双杂交(Y2H)和酵母单杂交(Y1H)是被用于研究蛋白-蛋白以及蛋白-DNA互作的**常用技术。为了方便和促进水稻育种研究,陈凡老师与欧易生物达成合作,整合双方优势资源,历经春秋与冬夏,成功构建了基于粳稻(日本晴)基因组的水稻转录因子文库。该项成果以“一种高效的筛选系统来鉴定大米转录因子的蛋白质-蛋白质或蛋白质-DNA相互作用伙伴”为题,发表于杂志JGG上。上海酵母文库规格
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