广东酵母文库领域

酵母文库实验本研究鉴定了一个可以与MdMYB9相互作用的蛋白MdTRB1。实验表明，MdTRB1可以正向调节花青素和原花青素的累积。MdTRB1与MdMYB9结合可以增强后者对下游基因的转录***活性。而MdTRB1与MdJAZ1的结合，可以干扰其与MdMYB9的互作，进而负向调控MdTRB1介导的对花青素和原花青素积累的促进作用。本研究表明，JAZ1-TRB1-MYB9复合物可以动态调控JA介导的花青素和原花青素的积累。本研究为进一步研究JA对花青素和原花青素生物合成的调节提供了新见解。酵母单杂交实验步骤酵母文库构建原理。广东酵母文库领域

通过酵母双杂交进行筛选，结果显示 SWC6 可以在蓝光下与 CRY1 相互作用（图 A-C）。同样，酵母双杂交实验显示 CRY2 也可以在蓝光下与 SWC6 相互作用（图 D）。并通过 pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 实验（图 E-L）证实 CRY1、CRY2 与 SWC6 的结合是蓝光依赖性的。SWC6 是真核生物中已报道的 SWR1 复合物亚基，负责催化 H2A.Z 在染色质上的替换。已报道 SWR1 复合物中 SWC6 可以与 ARP6 亚基结合。Pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 实验（图 A-H）显示，CRY1、CRY2 可以蓝光依赖性与 ARP6 结合。广东酵母文库领域欧易生物酵母平台，从公司成立伊始，伴随着公司和客户一路成长，栉风沐雨十多年。

本研究通过酵母双杂交筛选，鉴定到 CRY1 可以与 SWR1 复合物关键亚基 SWC6、ARP6 结合，共同以蓝光依赖模式调控 H2A.Z 在染色质的沉积。蓝光***的 CRY1 可以增强 SWC6 与 ARP6 的相互作用。此外，HY5 也可以与 SWC6、ARP6 结合，将 SWR1 复合物募集到 HY5 靶向位置，调控 HY5 靶基因的表达，进而影响拟南芥下胚轴的伸长据此，本研究提出拟南芥光形态建成调控的分子机制：CRY1 通过增强 SWR1 复合物活性和 HY5 介导 SWR1 复合物向 HY5 靶基因的募集，共同促进 H2A.Z 染色质沉积，以调控 HY5 靶基因的表达和蓝光条件下光形态建成。

单杂交筛选为了挖掘影响ALA诱导苹果黄酮醇积累的关键性调控因子，作者以Y1HGold[proMdFLS1-AbAi] 为诱饵，通过酵母单杂交筛选了ALA处理后的苹果愈伤组织cDNA文库。结果显示筛选出的蛋白质主要参与光合作用调控、碳糖代谢、氧化/渗透胁迫响应、***信号转导、木质素生物合成、果实成熟发育等过程，以及一些功能未知的蛋白质。其中， MdSCL8转录因子，由于其在草莓中的同源基因已被报导与黄酮的合成有关，引起了研究者的注意。进一步通过Y1H assay验证确认了MdSCL8可以与MdFLS1启动子互作（图2A）。通过双荧光素酶实验和GUS检测，发现MdSCL8可以负向调控MdFLS1启动子活性（图2B-D）。欧易生物是国内较早提供酵母杂交技术服务的生物公司，较早掌握Gateway和Smart两种建库方法。

酵母双杂交技术，自创建以来被广泛应用于蛋白互作研究领域，在生命科学的基础探秘研究中起着重要作用。然而该技术设计初衷，*是斯坦利先生为了完成申请学校经费的目的。该技术设计巧妙，它的许多优点在设计之初并未显现，反而在这么多年的高频使用和进一步开发利用过程中越发明显。（引用自MarcVidal&StanleyFields的“Theyeasttwo-hybridassay：stillfindingconnectionsafter25years”）:(1）尽管酵母杂交技术揭示了蛋白质结合位点的详细信息，但操作简单。只需2个质粒+1个菌株即可完成，且有不同体系方便选择。（2）该技术利用比较好的DNA结合位点，有效的***结构域和友好的报告基因系统，可以放大弱互作的信号。（3）该技术可用于各种物种的蛋白互作检测，具有物种普适性，尤其是人类蛋白。（4）衍生技术具有更***的应用，可扩展到检测蛋白质与DNA、蛋白质与RNA、蛋白质与小分子以及其他组合之间的相互作用，甚至可实现将生理相互作用与表型数据直接关联。当然，做过酵母杂交实验的小伙伴应该都了解，互作结果的判断，往往要等酵母生长好几天才能看出来（当然，小欧认为这在伟大的科研事业过程中算不上啥），互作强弱也是主观判断性较强，存在假阳性。欧易生物结合多年的文库构建经验。广东酵母文库领域

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通过传统的酵母双杂交系统，以PtDAL1为诱饵，筛选样本来源于不同年龄段的油松cDNA文库。将获得的阳性克隆，10个一组，挑选到1个96孔板的PCR板孔中，获得10*96个阳性克隆的96孔板。以其中阳性克隆mix为模板，进行PCR扩增，并将所有的PCR产物进行纯化。使用纯化后的PCR产物，进行打断后构建二代测序文库，通过NGS测序，获得6G的阳性克隆数据。通过分析二代测序数据，获得阳性克隆基因信息（去冗余后获得135个互作子，包含21个TFs，2个TRs及酶类、热激蛋白、RNA结合等蛋白，部分见表1）。挑选重要的候选基因进行一对一验证（图2）。与拟南芥中同源基因AGL6的蛋白互作网络进行比对分析。对DAL1互作蛋白（DIPs）的基因表达谱、启动子中的顺势作用元件功能进行分析，并对DIPs进行GO注释（图3）。综合生信分析结果，构建针叶树老化途径的调控模型（图4）。广东酵母文库领域

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