酵母单杂交测试:为验证该文库在Y2H和Y1H体系中的有效性,作者以OsMADS1为诱饵筛选水稻转录因子文库,进行了酵母双杂交测试。以Ghd7的启动子片段为诱饵,进行了酵母单杂交测试。结果显示我们的水稻转录因子文库可以有效且高通量的检测蛋白-水稻TF、DNA-水稻TF间的相互作用。另外,该研究中指出,使用该文库筛选鉴定蛋白-TF互作,采用mating法较为方便,即Y2HGold-Bait诱饵菌液与Y187-TF文库菌液一对一杂交。而筛选鉴定DNA-TF互作,采用Y1HGold系统,即Y1HGold-pomoter筛选TF文库质粒更简单高效。此外,可通过降低筛选压力处理,进行弱相互作用的检测。Gateway方法酵母双杂交文库构建核系统与膜系。天津实力酵母文库
通过酵母双杂交进行筛选,结果显示 SWC6 可以在蓝光下与 CRY1 相互作用(图 A-C)。同样,酵母双杂交实验显示 CRY2 也可以在蓝光下与 SWC6 相互作用(图 D)。并通过 pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 实验(图 E-L)证实 CRY1、CRY2 与 SWC6 的结合是蓝光依赖性的。SWC6 是真核生物中已报道的 SWR1 复合物亚基,负责催化 H2A.Z 在染色质上的替换。已报道 SWR1 复合物中 SWC6 可以与 ARP6 亚基结合。Pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 实验(图 A-H)显示,CRY1、CRY2 可以蓝光依赖性与 ARP6 结合。天津发展酵母文库酵母文库筛选做文库筛选前,首先需要检测你的诱饵的自***活性和对酵母的毒性。
酵母文库实验实验表明,MdTRB1 可以正向调节花青素和原花青素的累积。MdTRB1 与 MdMYB9 结合可以增强后者对下游基因的转录***活性。而 MdTRB1 与 MdJAZ1 的结合,可以干扰其与 MdMYB9 的互作,进而负向调控 MdTRB1 介导的对花青素和原花青素积累的促进作用。本研究表明,JAZ1-TRB1-MYB9 复合物可以动态调控 JA 介导的花青素和原花青素的积累。本研究为进一步研究 JA 对花青素和原花青素生物合成的调节提供了新见解。本研究鉴定了一个可以与 MdMYB9 相互作用的蛋白 MdTRB1。实验表明,MdTRB1 可以正向调节花青素和原花青素的累积。
酵母文库实验:本研究报道了 OsNF-YB9 和 OsNF-YB7 在水稻中呈现亚功能化。OsNF-YB7 主要在胚中表达,而 OsNF-YB9 主要在发育中的胚乳中表达。在拟南芥 lec1-1 中异源表达 OsNF-YB9 或 OsNF-YB7 可以弥补 lec1-1 缺陷。OsNF-YB9 功能缺失导致种子发育异常,种子变长、变窄、变薄,垩白率较高。此外,osnf-yb9 中淀粉合成相关基因的表达紊乱。OsNF-YB9 可以与主要在水稻胚乳中表达的蔗糖合酶蛋白激酶 SPK 相互作用。spk 敲除突变体种子与 osnf-yb9 突变体种子都表现出垩白增加的表型。OsNF-YB9 在水稻和拟南芥中的异位表达导致了种子变小。综上表明,OsNF-YB9 在水稻种子发育中起到关键调控作用。酵母文库构建方法酵母筛库构建酵母文库的意义。
通过酵母双杂交文库进行了互作蛋白的筛选,结果显示TaTIFY9可以与TaSRL1相互作用(下图A),并通过Bi-FC、荧光互补实验得以证实(图B-C)。TaTIFY9属于茉莉酸信号途径关键因子JAZ家族的成员之一。RT-PCR显示TaTIFY9也主要表达于小麦根部,外源施加茉莉酸可以***诱导TaTIFY9表达。这一结果表明,TaSRL1可能通过与TIFY9结合介导了茉莉酸对根生长的抑制。已有研究表明 ERF 蛋白可以特异性结合到靶基因启动子序列中的 GCC-box 序列。TaSRL1 属于 ERF 家族。在生长素转运基因 TaPIN2 的启动子序列中含有一个 GCC-box 序列。酵母单杂交实验显示,TaSRL1 可以直接与 TaPIN2 启动子结合并***其表达(图 A),但该***作用会被TaSRL1的互作蛋白TaTIFY9 所抑制(图 B和C)。欧易生物酵母文库项目发表 Science 封面文章欧易生物。天津发展酵母文库
酵母文库和测序建库是什么?。天津实力酵母文库
酵母双杂交文库:疟疾是人类**古老的疾病之一,每年4月25日是世界防治疟疾日,疟疾目前仍是公众健康所面临的**严重威胁之一。基于青蒿素的联合处理法(ACTs)是WHO推荐的比较好处理方案。因发现具有抗疟作用的青蒿素,挽救了数百万人的生命,屠呦呦教授获得了2015年诺贝尔生理或医学奖,从青蒿中分离出的青蒿素被推荐作为抗疟疾的优先药物。之前研究表明,茉莉酸(JA)介导促成的青蒿素积累依赖于光,转录因子HY5也通过参与光信号调控促进青蒿素合成。然而,光与JA相互作用机制及其对青蒿素生物合成调控的潜在机理仍未得到解决。天津实力酵母文库
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