酵母文库筛选:为了系统地揭示调控丛枝菌根共生的转录因子,研究者以51个水稻基因的启动子为诱饵,利用包含1570个水稻全长转录因子的文库进行了酵母单杂交筛选。这51个基因主要是已报道的参与或调节菌根共生的基因。文库筛选发现了一个由266个转录因子和47个启动子高度连接的网络,称之为"丛枝菌根共生酵母单杂交网络(YAM)"。平均每个启动子可以和4个转录因子互作。266个转录因子分属至少11个转录因子家族。72%(192个)的YAM转录因子在根中存在表达(FPKM>1)。与非定殖根相比,19个YAM转录因子在丛枝菌根***定殖的根中表达上调。酵母单杂筛库酵母文库筛选酵母双杂交筛库步骤。上海品质酵母文库报价
通过酵母双杂交文库进行了互作蛋白的筛选,结果显示TaTIFY9可以与TaSRL1相互作用(下图A),并通过Bi-FC、荧光互补实验得以证实(图B-C)。TaTIFY9属于茉莉酸信号途径关键因子JAZ家族的成员之一。RT-PCR显示TaTIFY9也主要表达于小麦根部,外源施加茉莉酸可以***诱导TaTIFY9表达。这一结果表明,TaSRL1可能通过与TIFY9结合介导了茉莉酸对根生长的抑制。已有研究表明 ERF 蛋白可以特异性结合到靶基因启动子序列中的 GCC-box 序列。TaSRL1 属于 ERF 家族。在生长素转运基因 TaPIN2 的启动子序列中含有一个 GCC-box 序列。酵母单杂交实验显示,TaSRL1 可以直接与 TaPIN2 启动子结合并***其表达(图 A),但该***作用会被TaSRL1的互作蛋白TaTIFY9 所抑制(图 B和C)。河南建库酵母文库报价酵母结构及功能介绍酵母的应用 。
酵母文库实验:MAPK级联***是植物防御病原体入侵信号传导过程中的关键事件,MAPKs靶向并磷酸化调节下游基因转录的转录因子,**终响应病原菌的侵入。WRKYs转录因子是MAPK级联的重要目标,在植物对各种病原体的抗性中起着关键作用。苹果如何响应炭疽菌入侵,将信号传导到细胞内,以及哪个转录因子负责协调促进GLS耐受均尚不清楚。本研究在苹果炭疽叶枯病易感品种“嘎拉”中发现了一个由苹果炭疽菌******诱导的转录因子MdWRKY17。在6个易感苹果种质中,MdWRKY17表达水平***高于6个耐受苹果种质,同时对应的水杨酸含量降低,证实了MdWRKY17介导的水杨酸降解在GLS耐受中的关键作用。
酵母双杂交技术,自创建以来被广泛应用于蛋白互作研究领域,在生命科学的基础探秘研究中起着重要作用。然而该技术设计初衷,*是斯坦利先生为了完成申请学校经费的目的。该技术设计巧妙,它的许多优点在设计之初并未显现,反而在这么多年的高频使用和进一步开发利用过程中越发明显。(引用自MarcVidal&StanleyFields的“Theyeasttwo-hybridassay:stillfindingconnectionsafter25years”):(1)尽管酵母杂交技术揭示了蛋白质结合位点的详细信息,但操作简单。只需2个质粒+1个菌株即可完成,且有不同体系方便选择。(2)该技术利用比较好的DNA结合位点,有效的***结构域和友好的报告基因系统,可以放大弱互作的信号。(3)该技术可用于各种物种的蛋白互作检测,具有物种普适性,尤其是人类蛋白。(4)衍生技术具有更***的应用,可扩展到检测蛋白质与DNA、蛋白质与RNA、蛋白质与小分子以及其他组合之间的相互作用,甚至可实现将生理相互作用与表型数据直接关联。当然,做过酵母杂交实验的小伙伴应该都了解,互作结果的判断,往往要等酵母生长好几天才能看出来(当然,小欧认为这在伟大的科研事业过程中算不上啥),互作强弱也是主观判断性较强,存在假阳性。酵母文库构建方法酵母筛库构建酵母文库的意义。
酵母双杂交文库:为研究松树生长时相转变和生殖发育的奥秘,本研究收集了油松 7 个年龄段的叶片进行了转录组测序。加权基因共表达网络分析(WGCNA)鉴定到一个与年龄***相关的基因模块(图 A)。按照表达模式,可以分为 2 个子模块:随年龄增长而表达上升的基因子模块、随年龄增长而表达降低的基因子模块(图 B-D)。这些基因在 5-7 年营养生长至生殖生长过渡期发生了一个明显的表达模式转变,表明在生殖发育启动阶段存在一个相对剧烈的时相转变过程。博士期间长期从事酵母单/双杂交文库构建及筛选的工作。陕西什么是酵母文库做什么
文库质粒与酵母文库载体重组。上海品质酵母文库报价
酵母文库实验实验表明,MdTRB1 可以正向调节花青素和原花青素的累积。MdTRB1 与 MdMYB9 结合可以增强后者对下游基因的转录***活性。而 MdTRB1 与 MdJAZ1 的结合,可以干扰其与 MdMYB9 的互作,进而负向调控 MdTRB1 介导的对花青素和原花青素积累的促进作用。本研究表明,JAZ1-TRB1-MYB9 复合物可以动态调控 JA 介导的花青素和原花青素的积累。本研究为进一步研究 JA 对花青素和原花青素生物合成的调节提供了新见解。本研究鉴定了一个可以与 MdMYB9 相互作用的蛋白 MdTRB1。实验表明,MdTRB1 可以正向调节花青素和原花青素的累积。上海品质酵母文库报价
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