酵母双杂交技术，自创建以来被广泛应用于蛋白互作研究领域，在生命科学的基础探秘研究中起着重要作用。然而该技术设计初衷，*是斯坦利先生为了完成申请学校经费的目的。该技术设计巧妙，它的许多优点在设计之初并未显现，反而在这么多年的高频使用和进一步开发利用过程中越发明显。（引用自MarcVidal&StanleyFields的“Theyeasttwo-hybridassay：stillfindingconnectionsafter25years”）:(1）尽管酵母杂交技术揭示了蛋白质结合位点的详细信息，但操作简单。只需2个质粒+1个菌株即可完成，且有不同体系方便选择。（2）该技术利用比较好的DNA结合位点，有效的***结构域和友好的报告基因系统，可以放大弱互作的信号。（3）该技术可用于各种物种的蛋白互作检测，具有物种普适性，尤其是人类蛋白。（4）衍生技术具有更***的应用，可扩展到检测蛋白质与DNA、蛋白质与RNA、蛋白质与小分子以及其他组合之间的相互作用，甚至可实现将生理相互作用与表型数据直接关联。当然，做过酵母杂交实验的小伙伴应该都了解，互作结果的判断，往往要等酵母生长好几天才能看出来（当然，小欧认为这在伟大的科研事业过程中算不上啥），互作强弱也是主观判断性较强，存在假阳性。酵母文库能够完美解决上述的问题,且一个文库可以并不是只有一个人可以用。湖北应用酵母文库做什么
通过酵母双杂交进行筛选，结果显示 SWC6 可以在蓝光下与 CRY1 相互作用（图 A-C）。同样，酵母双杂交实验显示 CRY2 也可以在蓝光下与 SWC6 相互作用（图 D）。并通过 pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 实验（图 E-L）证实 CRY1、CRY2 与 SWC6 的结合是蓝光依赖性的。SWC6 是真核生物中已报道的 SWR1 复合物亚基，负责催化 H2A.Z 在染色质上的替换。已报道 SWR1 复合物中 SWC6 可以与 ARP6 亚基结合。Pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 实验（图 A-H）显示，CRY1、CRY2 可以蓝光依赖性与 ARP6 结合。辽宁生物技术酵母文库报价酵母文库质粒使用指南酵母菌的介绍 。
酵母双杂交文库：为研究松树生长时相转变和生殖发育的奥秘，本研究收集了油松 7 个年龄段的叶片进行了转录组测序。加权基因共表达网络分析（WGCNA）鉴定到一个与年龄***相关的基因模块（图 A）。按照表达模式，可以分为 2 个子模块：随年龄增长而表达上升的基因子模块、随年龄增长而表达降低的基因子模块（图 B-D）。这些基因在 5-7 年营养生长至生殖生长过渡期发生了一个明显的表达模式转变，表明在生殖发育启动阶段存在一个相对剧烈的时相转变过程。
蛋白被泛素化后（即蛋白上结合了泛素），意味着将要被运往蛋白酶体降解，一般用于降解细胞内老弱病残蛋白，再回收利用。同时也被用于排除异己，抵御外敌。该过程需要一系列酶介导：泛素***酶（E1）、泛素偶联酶（E2）和泛素E3连接酶（E3）。其中E3是起特异性识别作用的，即决定谁该被降解，不能把好同志降解掉。所以E3基因很多，植物中主要有四种类型：HECT、RING、U-box和CRLs。其中CRLs是植物中含量**丰富的E3连接酶。本研究中，通过酵母双杂交筛选到的标题蛋白MdBT2，整好是CRLs亚家族之一。因此作者推测MdBT2可能在与ApNMV1a结合后，起到了促进其泛素化和降解的作用。根据每个客户的研究目标和内容灵活定制研究方案。既能提供建库服务，也能提供筛库服务。
利用酵母文库进行双杂交筛选，结果显示 MdBT2 可以与 MdRGL3a 结合。MdRGL3a 编码 GA 信号阻遏物 DELLA 蛋白，主要分布于细胞核中。MdRGL3a 对于 GA 处理非常敏感，可以引起其发生降解，PAC 处理可以提高其稳定性。进一步的酵母一对一杂交验证实验表明，两者的结合依赖于 MdBT2 的 BTB 和 BACK 结构域、MdRGL3a 的 LHRI 和 SAW motif（图 A-B）。并通过 GST pull-down、BiFC 实验也证实了 MdBT2与 MdRGL3a 的结合（图 C-D）。细胞外降解实验显示，与对照相比，MdRGL3a 与过表达 MdBT2 的愈伤组织的总蛋白共同孵育，会导致 MdRGL3a 的降解加快；而与抑制 MdBT2 表达的愈伤组织的总蛋白共同孵育，会导致 MdRGL3a 的降解减缓（图 A）。并且蛋白酶体抑制剂 MG132 可以***抑制 MdRGL3a 的降解（图 B）。改变 MdRGL3a 表达量并不影响 MdBT2 的降解。以上结果表明，MdRGL3a 可能通过 26S 蛋白酶体途径发生降解，而 MdBT2 可以抑制 MdRGL3a 的降解。酵母三杂交酵母文库数据库。黑龙江应用酵母文库做什么
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酵母双杂交（Y2H）：植物转录因子（Plant transcripter factors， TFs）是调控植物生长发育和环境适应性的关键分子。虽然在一些数据库中，如RiceSRTFDB （Priya and Jain， 2013）， Ricettissuetfdb （Chen et al.，PlnTFDB （Pérez-Rodríguez et al.， 2009）和PlantTFDB （Jin et al.， 2017），可以预测水稻转录因子功能。但通过具体实验研究，来直接证实转录因子对植物的调控作用仍然是必不可少的。酵母双杂交（Y2H）和酵母单杂交（Y1H）是被用于研究蛋白-蛋白以及蛋白-DNA互作的**常用技术。为了方便和促进水稻育种研究，陈凡老师与欧易生物达成合作，整合双方优势资源，历经春秋与冬夏，成功构建了基于粳稻（日本晴）基因组的水稻转录因子文库。该项成果以“一种高效的筛选系统来鉴定大米转录因子的蛋白质-蛋白质或蛋白质-DNA相互作用伙伴”为题，发表于杂志JGG上。湖北应用酵母文库做什么
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