酵母双杂交文库:植物从营养生长到生殖生长时相的不可逆转变,是植物生命周期中的一个关键阶段,是植物生存和繁殖至为关键的重要事件。在开始繁殖之前,许多多年生木本植物经历了一个相当漫长的幼年时期。与模式植物(如拟南芥)相比,针叶树通常具有非常长的生命周期。尽管在模式植物开花时间控制研究上取得相当大的进展,但对多年生树木,特别是针叶树年龄信号的调控机制仍知之甚少。因此,深入研究林木年龄信号对生殖发育过程的影响具有重要的理论和实践意义。酵母及其应用ppt课件 酵母及其应用 。河南运用酵母文库
通过酵母双杂交进行筛选,结果显示 SWC6 可以在蓝光下与 CRY1 相互作用(图 A-C)。同样,酵母双杂交实验显示 CRY2 也可以在蓝光下与 SWC6 相互作用(图 D)。并通过 pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 实验(图 E-L)证实 CRY1、CRY2 与 SWC6 的结合是蓝光依赖性的。SWC6 是真核生物中已报道的 SWR1 复合物亚基,负责催化 H2A.Z 在染色质上的替换。已报道 SWR1 复合物中 SWC6 可以与 ARP6 亚基结合。Pull-down、split-LUC、semi-in vivo pull-down、Co-IP 实验(图 A-H)显示,CRY1、CRY2 可以蓝光依赖性与 ARP6 结合。技术酵母文库价格酵母生长速度快且容易操作的特点酵母文库。
通过传统的酵母双杂交系统,以PtDAL1为诱饵,筛选样本来源于不同年龄段的油松cDNA文库。将获得的阳性克隆,10个一组,挑选到1个96孔板的PCR板孔中,获得10*96个阳性克隆的96孔板。以其中阳性克隆mix为模板,进行PCR扩增,并将所有的PCR产物进行纯化。使用纯化后的PCR产物,进行打断后构建二代测序文库,通过NGS测序,获得6G的阳性克隆数据。通过分析二代测序数据,获得阳性克隆基因信息(去冗余后获得135个互作子,包含21个TFs,2个TRs及酶类、热激蛋白、RNA结合等蛋白,部分见表1)。挑选重要的候选基因进行一对一验证(图2)。与拟南芥中同源基因AGL6的蛋白互作网络进行比对分析。对DAL1互作蛋白(DIPs)的基因表达谱、启动子中的顺势作用元件功能进行分析,并对DIPs进行GO注释(图3)。综合生信分析结果,构建针叶树老化途径的调控模型(图4)。
酵母文库筛选:为了系统地揭示调控丛枝菌根共生的转录因子,研究者以51个水稻基因的启动子为诱饵,利用包含1570个水稻全长转录因子的文库进行了酵母单杂交筛选。这51个基因主要是已报道的参与或调节菌根共生的基因。文库筛选发现了一个由266个转录因子和47个启动子高度连接的网络,称之为"丛枝菌根共生酵母单杂交网络(YAM)"。平均每个启动子可以和4个转录因子互作。266个转录因子分属至少11个转录因子家族。72%(192个)的YAM转录因子在根中存在表达(FPKM>1)。与非定殖根相比,19个YAM转录因子在丛枝菌根***定殖的根中表达上调。2酵母展示质量技术酵母展示技术,共收录30多个行业,涵盖多行业资料一键下载。
小欧从2018年即开始关注酵母杂交与高通量测序相结合的技术发展,如2017年CaoGang老师等发表的RLL-Y2H技术,实现了文库筛文库可能,该技术通过对酵母双杂常用载体的改造,并结合高通量测序,可直接获得AD-BD互作蛋白对。所用方法相当巧妙,感兴趣的同学请点击《当酵母双杂交遇到高通量测序》。钮老师团队之前的研究已经鉴定了DAL1作为一种保守的针叶树年龄生物标记基因,在油松从营养生长到生殖生长的时相转变过程中起重要作用。为了进一步理解年龄效应如何驱动针叶树的发育,阐明与DAL1相关的蛋白互作网络很关键。钮老师团队利用传统的Y2H筛选技术结合NGS测序技术,优化得到了Y2H-seq技术,与传统的筛选测序相比,大幅度节省了时间和实验成本。酵母文库酵母双杂交筛库个性化定制研究方案。湖北应用酵母文库
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文库筛选做的好,培养基和转化试剂少不了。实验做不出、克隆生长不正常的小伙伴,你是不是会怀疑培养基配的有问题,或者转化试剂配的不对?欧易生物现隆重推出酵母双杂、单杂筛选、一对一互作验证的配套培养基、转化试剂啦~该系列产品,经欧易生物实验室多年使用、不断改良,质量保证,物美价廉。所有培养基均无需调pH,使用方便。*需将1袋**包装的培养基溶于500mlddH2O中,然后121℃高压灭菌15min,固体培养基冷却至50℃左右即可倒板使用,液体培养基冷却至室温后直接使用。从现在开始再也不用为重复配制试剂、重复做实验、不停的花费时间验证而头秃了。河南运用酵母文库
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