荧光寿命成像可以干什么?荧光寿命成像图像中每一个像素点在phasor图上都有一个对应的点。因此我们可以获取每个像素点的寿命信息,也可以获知每一寿命所对应的图像区域。荧光寿命成像可以提供荧光强度(光子数)和光子寿命的空间分布,具有200 nm的空间分辨率和皮秒量级的时间分辨率。通过双光子激发(结合飞秒...
荧光分析和成像技术因具有非常高的灵敏度和分子特异性而普遍的应用于生物物理、生物化学、医学、物理、化学等领域,利用荧光光谱技术和荧光显微技术可以分析样品中荧光团的组分和分布。不过,由于荧光分析技术大多是基于荧光强度的测量,容易受到激发光强度、样品浓度淬灭、荧光染料的分布浓度等因素的影响。荧光寿命通常来讲是一定的,不受激发光强度、荧光团浓度等因素的影响,只只与荧光团所处的微环境有关,因此,利用荧光寿命显微镜(Fluorescence lifetime imaging microscopy, FLIM)对样品进行荧光寿命成像,可以对样品所在的微环境中的许多物理参数如氧压、溶液疏水性等及生物化学参数如pH值、离子浓度等进行定量测量。此外,荧光寿命成像技术还可以同时获得分子状态和空间分布的信息。荧光寿命成像提供了寿命分布的二维图形视图。佛山分子荧光寿命成像费用
荧光寿命成像:作为荧光成像中除光谱和强度之外的新维度,当前,荧光寿命成像主要应用领域包括:用于样品分离,如利用不同染料荧光寿命的差异将不同组织、正常与病变细胞等有效分离。荧光团在光谱上非常相似(max 580 vs 573)无法分离,但它们在荧光寿命上差异明显。作为生物传感器,如评价药物/理化条件对细胞的影响、Ca+震荡等。充分拓展了寿光命成像的使用范围,实现可相互验证的多维度样品成像。实现真正的生物动力学分析和功能成像。湖北开放式荧光寿命成像报价荧光寿命成像(FLIM)对细胞信号传导及调控,蛋白间的相互作用等生物研究发挥着很大作用。
荧光寿命成像有几点优势:1.不需要考虑跳色的影响,从而免去了计算和去除跳色杂质信号的麻烦;去除跳色杂质的准确性很大程度上依赖于信噪比、成像流程的设计和控制、以及跳色信号估算的算法,这些因素使得通过稳态光强度测量荧光寿命成像的精确度在很多时候受到质疑。2.稳态光强度的荧光寿命成像测量很容易受荧光标记光漂白或是激发光散射背景的影响,而这些因素对FLIM-FRET的测量影响相对较低。3.荧光寿命成像可以定量的区分参与FRET和没有参与FRET的分子数量,这样深入的定量分析是稳态光强度方法做不到的。
荧光寿命成像(FLIM)的方法特别适合于体内诊断,因为它们是无创且无损的。因此,它们被普遍用于受试者的临床研究和医学检查。例如,该技术可以用于以下领域:皮肤的体内诊断:人类皮肤的多光子扩散层析成像结合了双光子激发和非解扫检测,因此,多光子FLIM可以提供组织层的光学切片图像,深度可达100 µm。人皮肤细胞的体内双光子成像是可能的,而不会损害组织的活力,可以从亚细胞分辨率重建三维结构。眼科检查:眼科FLIM结合了快速光束扫描和皮秒二极管激光器激发的功能。该方法非常灵敏,可以记录人眼眼底(背景)的寿命图像。通过这种方式,有可能及早发现眼部疾病,因为这些疾病通常伴随着眼底的代谢变化。反过来,这些引起内源性荧光团的荧光衰减参数的变化。荧光寿命成像这种技术相对较新,涉及到同时在图像的每个像素处确定荧光衰减时间的空间分布。
荧光寿命成像中的荧光寿命及其含义:假定一个无限窄的脉冲光(δ函数)激发n0个荧光分子到其激发态,处于激发态的分子将通过辐射或非辐射跃迁返回基态。假定两种衰减跃迁速率分别为Γ和knr,则激发态衰减速率可表示为:其中n(t)表示时间t时激发态分子的数目,由此可得到激发态物种的单指数衰减方程。荧光寿命定义为衰减总速率的倒数:荧光强度正比于衰减的激发态分子数,因此可将上式改写为:其中I0是时间为零时的荧光强度,τ为荧光寿命。也就是说荧光强度衰减到初始强度的1/e时所需要的时间就是该荧光物种在测定条件下的荧光寿命。实际上用荧光强度的对数对时间作图,直线斜率即为荧光寿命倒数的负值。荧光寿命也可以理解为荧光物种在激发态的统计平均停留时间。事实上当荧光物质被激发后有些激发态分子立即返回基态,有的甚至可以延迟到5倍于荧光寿命时才返回基态,这样就形成了实验测定的荧光强度衰减曲线。荧光寿命成像具有不同于荧光强度成像的众多优点;佛山分子荧光寿命成像费用
荧光寿命成像可用于多种生物应用,包括组织表面扫描、组织类型绘图、光动力治理、皮肤成像等。佛山分子荧光寿命成像费用
荧光寿命(FLT)是荧光团在发射光子并返回基态之前花费在激发态的时间。根据荧光基团的不同,FLT可以从皮秒到数百纳秒不等。荧光团群的寿命是指经荧光或非辐射过程的能量损失后,激发态分子数量以指数方式衰减到原始数量的N / e(36.8%)的时间。荧光寿命是荧光团的固有属性。FLT不依赖于荧光团浓度、样品吸收、样品厚度、测量方法、荧光强度、光漂白和/或激发强度。它受外部因素影响,如温度、极性和荧光淬灭剂的存在。荧光寿命对依赖于荧光团结构的内部因素敏感。佛山分子荧光寿命成像费用
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