荧光寿命成像基本参数
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荧光寿命成像企业商机

影响荧光寿命成像测量的因素:高浓度样品的影响:1)当激发光照射高浓度样品时,在激发光入口附近产生荧光,但这些荧光并不能进入荧光检测器。2)高浓度的分子之间相互作用而发生活性阻碍现象。3)荧光的再吸收:即荧光光谱的短波长端和激发光谱的长波长端如果相互重叠,则发生荧光再吸收。荧光寿命成像具有200 nm的空间分辨率和皮秒量级的时间分辨率。散射光的影响: 主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影响较大。校正办法:先用短的激发光激发,检出溶液的拉曼峰,然后进行荧光光谱校正。因为荧光光谱不随激发光波长的改变而改变,而拉曼光却随之改变。荧光寿命成像和生物发光的不同之处:生物发光与荧光寿命成像产生光子的过程和机制是完全不同的。重庆单分子荧光寿命成像一般多少钱

荧光寿命成像可以干什么?荧光寿命成像图像中每一个像素点在phasor图上都有一个对应的点。因此我们可以获取每个像素点的寿命信息,也可以获知每一寿命所对应的图像区域。荧光寿命成像可以提供荧光强度(光子数)和光子寿命的空间分布,具有200 nm的空间分辨率和皮秒量级的时间分辨率。通过双光子激发(结合飞秒脉冲和共焦显微镜)可以直接检测荧光和时间分辨的荧光寿命。这种无损检测技术,无需解剖或专门制造分层样品,不但可在样品表面,还可在样品表面以下实现深度解析测量。特别适用于新材料、光子学、光伏、光催化、生物材料、纳米材料和纳米复合材料以及其相关的原理探究和设计优化。福建单分子荧光寿命成像哪家实惠荧光寿命的测量和荧光寿命成像主要有时间相关单光子计数法、门控探测法、条纹相机测量法、频闪技术方式。

荧光寿命成像有什么作用?荧光寿命可以在频域或者时间域测量。时间域测量方法涉及用短光脉冲照射样品(比色皿、细胞或组织),然后随时间测量发射强度。FLT由衰减曲线的斜率确定。有几种荧光检测方法可用于寿命测量,其中时间相关单光子计数(TCSPC)可实现简单的数据收集和增强的定量光子计数。频域方法涉及高频率入射光的正弦调制。在该方法中,发射发生在与入射光相同的频率处,并且随着激发光兼有相位延迟和振幅的变化(解调)。寿命测量不需要波长比率探针来提供众多分析物的定量测定。寿命法通过使用光谱位移探针扩展了分析物浓度范围的灵敏度。

荧光寿命显微成像(Fluorescence lifetime imaging microscopy,FLIM)是荧光寿命测量和荧光显微技术的结合,荧光寿命显微成像具有高特异性、高灵敏度、可定量测量微环境变化和分子间相互作用、不受探针浓度、激发光强度和光漂白影响等优点。荧光寿命成像(FLIM)对细胞信号传导及调控,蛋白间的相互作用等生物研究发挥着很大作用。利用荧光寿命成像显微镜技术可实现可以实时监控发光纳米颗粒在活细胞内的稳定性。在过去的十年中,光学技术硬件和软件、材料科学和生物医学的迅速发展,共同促进了FLIM技术及其应用的巨大进步。荧光寿命显微成像技术具有对生物大分子结构、动力学信息和分子环境等进行高分辨高精度测量的能力。

分子的荧光寿命在几纳秒至几百纳秒之间,因此,测量荧光寿命成像需要极快响应时间的探测器。如今主要存在两类方案:一是时域测量,由一束窄脉冲将荧光分子激发至较高能态S1,接着测量荧光的发射几率随时间的变化。典型的时域测量方法有TCSPC和时间门(TG)两种。TCSPC利用快速秒表测量激发脉冲与探测荧光之间的时间差。使用高重复脉冲激发光激发样品,在每一个脉冲周期内,较多激发荧光分子发出一个光子,然后记录光子出现的时刻,并在该时刻记录一个光子,再下一个脉冲周期内也是相同的情况,经过多次计数可以得到荧光光子随时间的分布曲线。相似的,TG则探测不同时间窗口内的荧光强度,通过曲线拟合得到荧光寿命。二是频域测量,对连续激发光进行振幅调制后,分子发出的荧光强度也会受到振幅调制,两个调制信号之间存在与荧光寿命相关的相位差,因此可以测量该相位差计算荧光寿命。荧光寿命成像不但可在样品表面,还可在样品表面以下实现深度解析测量。珠海三维荧光寿命成像哪里买

荧光寿命成像拥有超快的激光技术,高速、高灵敏度探测技术。重庆单分子荧光寿命成像一般多少钱

荧光寿命成像和生物发光的不同之处:产生光子的原理不同,类似于我们都是通过肉眼去观察萤火虫和发光水母一样,生物发光与荧光成像在本质上,都是机体中特定的细胞或材料发出光子,被高灵敏度的CCD检测到形成图像,但是生物发光与荧光寿命成像产生光子的过程和机制是完全不同的。生物发光与荧光成像相同点:都需要对细胞进行标记。生物发光产生的光子和荧光寿命成像产生的光子都可以被高灵敏的CCD检测并形成图像,就像一个人的眼睛就可以既看到萤火虫又可以看到发光水母一样。荧光寿命(FLT)是荧光团在发射光子并返回基态之前花费在激发态的时间。根据荧光基团的不同,FLT可以从皮秒到数百纳秒不等。重庆单分子荧光寿命成像一般多少钱

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