酵母文库:2021年11月,山东农业大学园艺科学与工程学院张振鲁团队在MolecularPlantPathology(IF:5.663)发表了题为“Nitrate-inducibleMdBT2actsasarestrictionfactortolimitapplenecroticmosaicvirusgenomereplicationinMalusdomestica”的研究论文,报道了MdBT2蛋白在抑制病毒ApNMV基因组RNA复制中的作用。文章中所用酵母文库为欧易生物构建。ApNMV与ApMV相似,含有3种正义单链基因组RNAs:RNA1(编码1a蛋白,后面你会经常看到它,对病毒复制至关重要),RNA2(编码RNA聚合酶)和RNA3(编码MP),以及在3种RNA中排名第4的RNA4(编码CP)。当然苹果如何抵抗ApNMV的研究机制就更少了。从该技术开发以来,双杂交和三杂交报告基因数量从1个报告基因增加到了4个,降低了假阳性概率。安徽技术酵母文库做什么
通过传统的酵母双杂交系统,以PtDAL1为诱饵,筛选样本来源于不同年龄段的油松cDNA文库。将获得的阳性克隆,10个一组,挑选到1个96孔板的PCR板孔中,获得10*96个阳性克隆的96孔板。以其中阳性克隆mix为模板,进行PCR扩增,并将所有的PCR产物进行纯化。使用纯化后的PCR产物,进行打断后构建二代测序文库,通过NGS测序,获得6G的阳性克隆数据。通过分析二代测序数据,获得阳性克隆基因信息(去冗余后获得135个互作子,包含21个TFs,2个TRs及酶类、热激蛋白、RNA结合等蛋白,部分见表1)。挑选重要的候选基因进行一对一验证(图2)。与拟南芥中同源基因AGL6的蛋白互作网络进行比对分析。对DAL1互作蛋白(DIPs)的基因表达谱、启动子中的顺势作用元件功能进行分析,并对DIPs进行GO注释(图3)。综合生信分析结果,构建针叶树老化途径的调控模型(图4)。贵州筛库酵母文库做什么博士期间长期从事酵母单/双杂交文库构建及筛选的工作。
酵母双杂交文库:本研究通过7个树龄的油松样品转录组测序,鉴定到一个与年龄信号***相关的基因模块,该模块包含33个转录因子,包括SOC1-like、DAL1等。油松和晚坐果白皮松突变体中的基因表达模式分析显示,PtMADS11与生殖能力之间存在紧密相关性。酵母双杂交显示,MADS11和DAL1直接相关作用以参与对年龄信号的调控。过表达PtMADS11、PDAL1可以部分挽救拟南芥中miR156过表达或spl突变导致的开花延迟缺陷。只有PtMADS11可以挽救ft突变体中的开花缺陷,表明它与PtDAL1在拟南芥开花调控网络中发挥了不同的作用。
酵母文库筛选:为了系统地揭示调控丛枝菌根共生的转录因子,研究者以51个水稻基因的启动子为诱饵,利用包含1570个水稻全长转录因子的文库进行了酵母单杂交筛选。这51个基因主要是已报道的参与或调节菌根共生的基因。文库筛选发现了一个由266个转录因子和47个启动子高度连接的网络,称之为"丛枝菌根共生酵母单杂交网络(YAM)"。平均每个启动子可以和4个转录因子互作。266个转录因子分属至少11个转录因子家族。72%(192个)的YAM转录因子在根中存在表达(FPKM>1)。与非定殖根相比,19个YAM转录因子在丛枝菌根***定殖的根中表达上调。酵母杂交技术兼具通量高、结果直观、操作简易,重复性好的优势。
利用酵母文库进行双杂交筛选,结果显示 MdBT2 可以与 MdRGL3a 结合。MdRGL3a 编码 GA 信号阻遏物 DELLA 蛋白,主要分布于细胞核中。MdRGL3a 对于 GA 处理非常敏感,可以引起其发生降解,PAC 处理可以提高其稳定性。进一步的酵母一对一杂交验证实验表明,两者的结合依赖于 MdBT2 的 BTB 和 BACK 结构域、MdRGL3a 的 LHRI 和 SAW motif(图 A-B)。并通过 GST pull-down、BiFC 实验也证实了 MdBT2与 MdRGL3a 的结合(图 C-D)。细胞外降解实验显示,与对照相比,MdRGL3a 与过表达 MdBT2 的愈伤组织的总蛋白共同孵育,会导致 MdRGL3a 的降解加快;而与抑制 MdBT2 表达的愈伤组织的总蛋白共同孵育,会导致 MdRGL3a 的降解减缓(图 A)。并且蛋白酶体抑制剂 MG132 可以***抑制 MdRGL3a 的降解(图 B)。改变 MdRGL3a 表达量并不影响 MdBT2 的降解。以上结果表明,MdRGL3a 可能通过 26S 蛋白酶体途径发生降解,而 MdBT2 可以抑制 MdRGL3a 的降解。酵母单双杂交服务促销季技术服务。江苏建库酵母文库
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酵母文库实验实验表明,MdTRB1 可以正向调节花青素和原花青素的累积。MdTRB1 与 MdMYB9 结合可以增强后者对下游基因的转录***活性。而 MdTRB1 与 MdJAZ1 的结合,可以干扰其与 MdMYB9 的互作,进而负向调控 MdTRB1 介导的对花青素和原花青素积累的促进作用。本研究表明,JAZ1-TRB1-MYB9 复合物可以动态调控 JA 介导的花青素和原花青素的积累。本研究为进一步研究 JA 对花青素和原花青素生物合成的调节提供了新见解。本研究鉴定了一个可以与 MdMYB9 相互作用的蛋白 MdTRB1。实验表明,MdTRB1 可以正向调节花青素和原花青素的累积。安徽技术酵母文库做什么
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